CAJ | 학술논문

目的利用细胞内重组技术构建大容量人乳腺癌单链抗体(scFv)库.方法收集30例乳腺癌外周转移淋巴结,依次提取总RNA、mRNA,RT-PCR扩增全套可变区基因(VL、VH),各自克隆到T载体,构建T载体库.然后从T载体上酶切VL、VH分步克隆到噬粒载体pDAN5,经电转化TG1得到初级库.辅助性噬菌体感染初级库,使噬菌体抗体表面呈现.提纯噬菌体抗体,滴定浓度后感染大肠杆菌BS1365进行细胞内重组.噬菌体挽救后再次提纯滴定噬菌体,感染大肠杆菌DH5αF＇,得到次级库,并测序验证.结果 VH、VL T载体库分别为3.5×108和1.7×108,初级库库容量2.5×109.次级库库容量为2.5×1011.结论所采用的引物能够高效扩增目的片段,T载体的应用能够提高抗体基因的克隆效率,细胞内重组将进一步扩大库容量及增加其多样性,这种基于RT-PCR、T载体过渡、细胞内重组的路线能够构建大容量抗体库.
목적이용세포내중조기술구건대용량인유선암단련항체(scFv)고.방법수집30례유선암외주전이림파결,의차제취총RNA、mRNA,RT-PCR확증전투가변구기인(VL、VH),각자극륭도T재체,구건T재체고.연후종T재체상매절VL、VH분보극륭도서립재체pDAN5,경전전화TG1득도초급고.보조성서균체감염초급고,사서균체항체표면정현.제순서균체항체,적정농도후감염대장간균BS1365진행세포내중조.서균체만구후재차제순적정서균체,감염대장간균DH5αF＇,득도차급고,병측서험증.결과 VH、VL T재체고분별위3.5×108화1.7×108,초급고고용량2.5×109.차급고고용량위2.5×1011.결론소채용적인물능구고효확증목적편단,T재체적응용능구제고항체기인적극륭효솔,세포내중조장진일보확대고용량급증가기다양성,저충기우RT-PCR、T재체과도、세포내중조적로선능구구건대용량항체고.