农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
217-221
,共5页
陈苗%伍晓雄%商汉桥%戴汉川%刘红林%李奎
陳苗%伍曉雄%商漢橋%戴漢川%劉紅林%李奎
진묘%오효웅%상한교%대한천%류홍림%리규
猪胰岛素样生长因子Ⅰ%酵母偏爱密码子%毕赤酵母%分泌表达
豬胰島素樣生長因子Ⅰ%酵母偏愛密碼子%畢赤酵母%分泌錶達
저이도소양생장인자Ⅰ%효모편애밀마자%필적효모%분비표체
采用酵母偏爱密码子合成5条编码猪胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因的引物,利用重叠PCR技术获得含210 bp猪IGF-Ⅰ成熟蛋白基因的拼接产物.将该基因插入分泌表达载体pPIC9K中,转化巴斯德毕赤酵母菌(Pischia pastoris).经表型鉴定、PCR分析及G418筛选得到Muts型多拷贝整合菌,以1.5%甲醇诱导培养后,经SDS-PAGE检测表达产物,在7.5 kD处出现一特异蛋白条带,目的蛋白表达量达410 mg/L.Dotblot检测表明,重组蛋白可与抗IGF-Ⅰ多克隆抗体反应.
採用酵母偏愛密碼子閤成5條編碼豬胰島素樣生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因的引物,利用重疊PCR技術穫得含210 bp豬IGF-Ⅰ成熟蛋白基因的拼接產物.將該基因插入分泌錶達載體pPIC9K中,轉化巴斯德畢赤酵母菌(Pischia pastoris).經錶型鑒定、PCR分析及G418篩選得到Muts型多拷貝整閤菌,以1.5%甲醇誘導培養後,經SDS-PAGE檢測錶達產物,在7.5 kD處齣現一特異蛋白條帶,目的蛋白錶達量達410 mg/L.Dotblot檢測錶明,重組蛋白可與抗IGF-Ⅰ多剋隆抗體反應.
채용효모편애밀마자합성5조편마저이도소양생장인자Ⅰ(IGF-Ⅰ)기인적인물,이용중첩PCR기술획득함210 bp저IGF-Ⅰ성숙단백기인적병접산물.장해기인삽입분비표체재체pPIC9K중,전화파사덕필적효모균(Pischia pastoris).경표형감정、PCR분석급G418사선득도Muts형다고패정합균,이1.5%갑순유도배양후,경SDS-PAGE검측표체산물,재7.5 kD처출현일특이단백조대,목적단백표체량체410 mg/L.Dotblot검측표명,중조단백가여항IGF-Ⅰ다극륭항체반응.
