中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2007年
2期
168-171
,共4页
霍乱弧菌肠毒素B亚单位%双歧杆菌%大肠杆菌%基因克隆%表达
霍亂弧菌腸毒素B亞單位%雙歧桿菌%大腸桿菌%基因剋隆%錶達
곽란호균장독소B아단위%쌍기간균%대장간균%기인극륭%표체
目的 构建霍乱弧菌肠毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)基因的大肠杆菌表达重组质粒,并观察其在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达.方法 从pBI121质粒PCR扩增获得CTB基因片断,克隆到大肠杆菌载体pGEX-4T-1上,构建重组质粒,然后转化大肠杆菌DH5α和双歧杆菌.转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达的重组蛋白.结果 构建了重组质粒pGEX-4-CTB,CTB基因片段分子量约为376bp;在大肠杆菌中表达出35kD的霍乱弧菌B亚单位融合蛋白,经SDS-PAGE分析,相对分子量与文献相符,表达的蛋白约占细菌总蛋白的10%;在双岐杆菌中也能得到正确表达,表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约5%.Western blotting结果确认了该条带为CTB基因的产物.结论 构建的重组质粒pGEX-4T-CTB能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达.
目的 構建霍亂弧菌腸毒素B亞單位(Cholera toxin B subunit,CTB)基因的大腸桿菌錶達重組質粒,併觀察其在大腸桿菌和雙歧桿菌中的錶達.方法 從pBI121質粒PCR擴增穫得CTB基因片斷,剋隆到大腸桿菌載體pGEX-4T-1上,構建重組質粒,然後轉化大腸桿菌DH5α和雙歧桿菌.轉化菌經IPTG誘導,然後用SDS-PAGE和Western blot方法鑒定錶達的重組蛋白.結果 構建瞭重組質粒pGEX-4-CTB,CTB基因片段分子量約為376bp;在大腸桿菌中錶達齣35kD的霍亂弧菌B亞單位融閤蛋白,經SDS-PAGE分析,相對分子量與文獻相符,錶達的蛋白約佔細菌總蛋白的10%;在雙岐桿菌中也能得到正確錶達,錶達量較大腸桿菌低,佔細菌總蛋白約5%.Western blotting結果確認瞭該條帶為CTB基因的產物.結論 構建的重組質粒pGEX-4T-CTB能夠在大腸桿菌及雙歧桿菌中穫得錶達.
목적 구건곽란호균장독소B아단위(Cholera toxin B subunit,CTB)기인적대장간균표체중조질립,병관찰기재대장간균화쌍기간균중적표체.방법 종pBI121질립PCR확증획득CTB기인편단,극륭도대장간균재체pGEX-4T-1상,구건중조질립,연후전화대장간균DH5α화쌍기간균.전화균경IPTG유도,연후용SDS-PAGE화Western blot방법감정표체적중조단백.결과 구건료중조질립pGEX-4-CTB,CTB기인편단분자량약위376bp;재대장간균중표체출35kD적곽란호균B아단위융합단백,경SDS-PAGE분석,상대분자량여문헌상부,표체적단백약점세균총단백적10%;재쌍기간균중야능득도정학표체,표체량교대장간균저,점세균총단백약5%.Western blotting결과학인료해조대위CTB기인적산물.결론 구건적중조질립pGEX-4T-CTB능구재대장간균급쌍기간균중획득표체.
