西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2008年
1期
11-14,19
,共5页
张勃伟%权富生%赛务加浦%孙达权%马会明%张涌
張勃偉%權富生%賽務加浦%孫達權%馬會明%張湧
장발위%권부생%새무가포%손체권%마회명%장용
绿色荧光蛋白%基因表达%多聚酶联反应%人溶菌酶
綠色熒光蛋白%基因錶達%多聚酶聯反應%人溶菌酶
록색형광단백%기인표체%다취매련반응%인용균매
构建真核表达载体pEGFP-C1-hLYZ,并从基因水平研究人溶菌酶基因在体外培养的牛乳腺上皮细胞中的表达,为核移植提供转基因供体细胞.采用PCR的方法从人溶菌酶质粒中扩增854 bp人溶菌酶基因(包括完整的编码框446 bp).并克隆到pMD18-T载体上,用限制性内切酶Hind Ⅲ和BamHⅠ双酶切.将人溶菌酶基因的酶切片段(883 bp)定向克隆到pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组表达质粒pEGFP-hLYZ,并进行Hind Ⅲ和Bam HI双酶切鉴定.转染体外培养的牛乳腺上皮细胞,48 h后观察其表达情况.PCR检测溶菌酶基因的表达.成功构建了人溶菌酶真核表达载体,观察到表达绿色荧光蛋白的牛乳腺上皮细胞,并检测到溶菌酶基因.
構建真覈錶達載體pEGFP-C1-hLYZ,併從基因水平研究人溶菌酶基因在體外培養的牛乳腺上皮細胞中的錶達,為覈移植提供轉基因供體細胞.採用PCR的方法從人溶菌酶質粒中擴增854 bp人溶菌酶基因(包括完整的編碼框446 bp).併剋隆到pMD18-T載體上,用限製性內切酶Hind Ⅲ和BamHⅠ雙酶切.將人溶菌酶基因的酶切片段(883 bp)定嚮剋隆到pEGFP-C1的多剋隆位點中,構建重組錶達質粒pEGFP-hLYZ,併進行Hind Ⅲ和Bam HI雙酶切鑒定.轉染體外培養的牛乳腺上皮細胞,48 h後觀察其錶達情況.PCR檢測溶菌酶基因的錶達.成功構建瞭人溶菌酶真覈錶達載體,觀察到錶達綠色熒光蛋白的牛乳腺上皮細胞,併檢測到溶菌酶基因.
구건진핵표체재체pEGFP-C1-hLYZ,병종기인수평연구인용균매기인재체외배양적우유선상피세포중적표체,위핵이식제공전기인공체세포.채용PCR적방법종인용균매질립중확증854 bp인용균매기인(포괄완정적편마광446 bp).병극륭도pMD18-T재체상,용한제성내절매Hind Ⅲ화BamHⅠ쌍매절.장인용균매기인적매절편단(883 bp)정향극륭도pEGFP-C1적다극륭위점중,구건중조표체질립pEGFP-hLYZ,병진행Hind Ⅲ화Bam HI쌍매절감정.전염체외배양적우유선상피세포,48 h후관찰기표체정황.PCR검측용균매기인적표체.성공구건료인용균매진핵표체재체,관찰도표체록색형광단백적우유선상피세포,병검측도용균매기인.
