中国现代神经疾病杂志
中國現代神經疾病雜誌
중국현대신경질병잡지
CHINESE JOURNAL OF CONTEMPORARY NEUROLOGY AND NEUROSURGERY
2008年
2期
129-133
,共5页
苏峻峰%陈万金%吴志英%王柠%林宇%林珉婷%幕容慎行
囌峻峰%陳萬金%吳誌英%王檸%林宇%林珉婷%幕容慎行
소준봉%진만금%오지영%왕저%림우%림민정%막용신행
肌萎缩,脊髓性%聚合酶链反应%DNA引物%基因扩增
肌萎縮,脊髓性%聚閤酶鏈反應%DNA引物%基因擴增
기위축,척수성%취합매련반응%DNA인물%기인확증
目的 建立单细胞巢式聚合酶链反应技术,并探讨进行脊髓性肌萎缩症基因诊断的可行性,为植入前遗传学诊断奠定基础.方法 应用显微操作技术从外周血中分离单个淋巴细胞,制备单细胞DNA模板.分别应用巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增两种方法扩增正常对照者外周血中单个淋巴细胞运动神经元生存(SMN)基因第7、8号外显子,计算其阳性率,建立SMN1基因的单细胞巢式聚合酶链反应技术.并应用该项技术及限制性酶切对1例脊髓性肌萎缩症患者进行基因诊断.结果 正常对照者巢式聚合酶链反应共扩增60个外周血单个淋巴细胞SMN1基因第7号外显子,其中54个扩增成功,阳性率为90%;引物延伸预扩增共扩增10个外周血单个淋巴细胞,巢式聚合酶链反应分别扩增SMN1基因第7、8号外显子,在20个聚合酶链反应扩增中共有17个单个淋巴细胞扩增成功,阳性率为85%.应用巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增两种方法对1例脊髓性肌萎缩症患者单个淋巴细胞扩增后经限制性酶切显示SMN1基因缺失,结果与全血基因组聚合酶链反应-限制性酶切一致.结论 巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增方法各有优缺点,巢式聚合酶链反应耗时短、操作简便,可作为脊髓性肌萎缩症患者单细胞基因诊断的首选方法.
目的 建立單細胞巢式聚閤酶鏈反應技術,併探討進行脊髓性肌萎縮癥基因診斷的可行性,為植入前遺傳學診斷奠定基礎.方法 應用顯微操作技術從外週血中分離單箇淋巴細胞,製備單細胞DNA模闆.分彆應用巢式聚閤酶鏈反應和引物延伸預擴增兩種方法擴增正常對照者外週血中單箇淋巴細胞運動神經元生存(SMN)基因第7、8號外顯子,計算其暘性率,建立SMN1基因的單細胞巢式聚閤酶鏈反應技術.併應用該項技術及限製性酶切對1例脊髓性肌萎縮癥患者進行基因診斷.結果 正常對照者巢式聚閤酶鏈反應共擴增60箇外週血單箇淋巴細胞SMN1基因第7號外顯子,其中54箇擴增成功,暘性率為90%;引物延伸預擴增共擴增10箇外週血單箇淋巴細胞,巢式聚閤酶鏈反應分彆擴增SMN1基因第7、8號外顯子,在20箇聚閤酶鏈反應擴增中共有17箇單箇淋巴細胞擴增成功,暘性率為85%.應用巢式聚閤酶鏈反應和引物延伸預擴增兩種方法對1例脊髓性肌萎縮癥患者單箇淋巴細胞擴增後經限製性酶切顯示SMN1基因缺失,結果與全血基因組聚閤酶鏈反應-限製性酶切一緻.結論 巢式聚閤酶鏈反應和引物延伸預擴增方法各有優缺點,巢式聚閤酶鏈反應耗時短、操作簡便,可作為脊髓性肌萎縮癥患者單細胞基因診斷的首選方法.
목적 건립단세포소식취합매련반응기술,병탐토진행척수성기위축증기인진단적가행성,위식입전유전학진단전정기출.방법 응용현미조작기술종외주혈중분리단개림파세포,제비단세포DNA모판.분별응용소식취합매련반응화인물연신예확증량충방법확증정상대조자외주혈중단개림파세포운동신경원생존(SMN)기인제7、8호외현자,계산기양성솔,건립SMN1기인적단세포소식취합매련반응기술.병응용해항기술급한제성매절대1례척수성기위축증환자진행기인진단.결과 정상대조자소식취합매련반응공확증60개외주혈단개림파세포SMN1기인제7호외현자,기중54개확증성공,양성솔위90%;인물연신예확증공확증10개외주혈단개림파세포,소식취합매련반응분별확증SMN1기인제7、8호외현자,재20개취합매련반응확증중공유17개단개림파세포확증성공,양성솔위85%.응용소식취합매련반응화인물연신예확증량충방법대1례척수성기위축증환자단개림파세포확증후경한제성매절현시SMN1기인결실,결과여전혈기인조취합매련반응-한제성매절일치.결론 소식취합매련반응화인물연신예확증방법각유우결점,소식취합매련반응모시단、조작간편,가작위척수성기위축증환자단세포기인진단적수선방법.
