CAJ | 학술논문

背景与目的:富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3(leucine-rich repeats and immunoglobin-like domains 3,LRIG3)是LRIG基因家族成员之一,在多种肿瘤中均有表达下调,但其作用尚不明了.本研究旨在探讨RNA干扰沉默LRIG3基因表达对神经胶质瘤细胞系GL15增殖及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen.PCNA)和Ki-67表达的影响及其机制.方法:用携带U6启动子和LRIG3特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的质粒载体pGenesi12-LRIG3-shRNA1、pGenesi12-LRIG3-shRNA2及含非特异性shRNA编码序列的对照质粒pGenesi12-negative shRNA(neg)转染胶质瘤细胞系GL15,G418筛选出稳定株,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测LRIG3表达的改变,应用噻唑蓝(MTY)法检测稳定转染后对GL15细胞增殖的影响.应用免疫组化SABC法检测对照组和实验组GL15细胞中PCNA和Ki-67的表达.结果:shRNA1及shRNA2组细胞LRIG3 mRNA水平与对照组相比分别下降了52.4%和63.8%,LRIG3蛋白水平分别下降了50.9%和67.4%.MTY结果显示实验组细胞增殖率高于对照组.对照组细胞PCNA阳性率为(35.40+5.69)%,shRNA1及shRNA2组细胞PcNA阳性率分别为(72.13±5.64)%和(81.93±5.23)%,差异均有统计学意义(P＜0.01).Ki-67阳性率在对照组细胞为(49.73±5.73)%,shRNA1及shRNA2组细胞分别为(82.27+5.50)%和(88.67±3.52)%,差异均有统计学意义(P＜0.01).Ki-67表达与PcNA表达呈正相关(r=0.932,P＜0.001).结论:下调LRIG3基因表达可促进胶质瘤细胞的增殖.
배경여목적:부함량안산중복서렬면역구단백양단백3(leucine-rich repeats and immunoglobin-like domains 3,LRIG3)시LRIG기인가족성원지일,재다충종류중균유표체하조,단기작용상불명료.본연구지재탐토RNA간우침묵LRIG3기인표체대신경효질류세포계GL15증식급증식세포핵항원(proliferating cell nuclear antigen.PCNA)화Ki-67표체적영향급기궤제.방법:용휴대U6계동자화LRIG3특이성단발협RNA(short hairpin RNA,shRNA)서렬적질립재체pGenesi12-LRIG3-shRNA1、pGenesi12-LRIG3-shRNA2급함비특이성shRNA편마서렬적대조질립pGenesi12-negative shRNA(neg)전염효질류세포계GL15,G418사선출은정주,역전록취합매련반응(RT-PCR)화Western blot법검측LRIG3표체적개변,응용새서람(MTY)법검측은정전염후대GL15세포증식적영향.응용면역조화SABC법검측대조조화실험조GL15세포중PCNA화Ki-67적표체.결과:shRNA1급shRNA2조세포LRIG3 mRNA수평여대조조상비분별하강료52.4%화63.8%,LRIG3단백수평분별하강료50.9%화67.4%.MTY결과현시실험조세포증식솔고우대조조.대조조세포PCNA양성솔위(35.40+5.69)%,shRNA1급shRNA2조세포PcNA양성솔분별위(72.13±5.64)%화(81.93±5.23)%,차이균유통계학의의(P＜0.01).Ki-67양성솔재대조조세포위(49.73±5.73)%,shRNA1급shRNA2조세포분별위(82.27+5.50)%화(88.67±3.52)%,차이균유통계학의의(P＜0.01).Ki-67표체여PcNA표체정정상관(r=0.932,P＜0.001).결론:하조LRIG3기인표체가촉진효질류세포적증식.