浙江理工大学学报
浙江理工大學學報
절강리공대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG SCI-TECH UNIVERSITY
2010年
6期
924-927,937
,共5页
诱导多能干细胞%转录因子%腺病毒载体
誘導多能榦細胞%轉錄因子%腺病毒載體
유도다능간세포%전록인자%선병독재체
构建并鉴定携带人oct4、klf4、sox2、nanog 4个基因的腺病毒栽体,重组出能同时表达这4种转录因子的腺病毒.为进一步诱导多能干细胞的研究提供新方法.使用口蹄疫病毒2A序列将人的oct4、、sox2、nanog 4个基因顺序连接,定向克隆至腺病毒载体pDC328上,并在nanog下游插入红色荧光蛋白dsRed2作为报告基因.利用酶切及PCR方法鉴定病毒载体的正确性;荧光显微镜下观察病毒感染HEK 293细胞24 h后红色荧光的表达,检测病毒功能;实时定量PCR检测细胞内4种基因的表达情况.结果表明,酶切后DNA电泳鉴定证实栽体构建成功,重组后病毒PCR显示病毒携带oct4、klf4、sox2、nanog 基因;荧光显微镜下观测到红色荧光的表达,实时定量PCR检测到细胞内4种基因的表达.本研究成功构建的腺病毒载体,能够介导以上4种转录因子在细胞内的同时表达,为进一步诱导多能干细胞的提供新方法.
構建併鑒定攜帶人oct4、klf4、sox2、nanog 4箇基因的腺病毒栽體,重組齣能同時錶達這4種轉錄因子的腺病毒.為進一步誘導多能榦細胞的研究提供新方法.使用口蹄疫病毒2A序列將人的oct4、、sox2、nanog 4箇基因順序連接,定嚮剋隆至腺病毒載體pDC328上,併在nanog下遊插入紅色熒光蛋白dsRed2作為報告基因.利用酶切及PCR方法鑒定病毒載體的正確性;熒光顯微鏡下觀察病毒感染HEK 293細胞24 h後紅色熒光的錶達,檢測病毒功能;實時定量PCR檢測細胞內4種基因的錶達情況.結果錶明,酶切後DNA電泳鑒定證實栽體構建成功,重組後病毒PCR顯示病毒攜帶oct4、klf4、sox2、nanog 基因;熒光顯微鏡下觀測到紅色熒光的錶達,實時定量PCR檢測到細胞內4種基因的錶達.本研究成功構建的腺病毒載體,能夠介導以上4種轉錄因子在細胞內的同時錶達,為進一步誘導多能榦細胞的提供新方法.
구건병감정휴대인oct4、klf4、sox2、nanog 4개기인적선병독재체,중조출능동시표체저4충전록인자적선병독.위진일보유도다능간세포적연구제공신방법.사용구제역병독2A서렬장인적oct4、、sox2、nanog 4개기인순서련접,정향극륭지선병독재체pDC328상,병재nanog하유삽입홍색형광단백dsRed2작위보고기인.이용매절급PCR방법감정병독재체적정학성;형광현미경하관찰병독감염HEK 293세포24 h후홍색형광적표체,검측병독공능;실시정량PCR검측세포내4충기인적표체정황.결과표명,매절후DNA전영감정증실재체구건성공,중조후병독PCR현시병독휴대oct4、klf4、sox2、nanog 기인;형광현미경하관측도홍색형광적표체,실시정량PCR검측도세포내4충기인적표체.본연구성공구건적선병독재체,능구개도이상4충전록인자재세포내적동시표체,위진일보유도다능간세포적제공신방법.
