中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2010年
6期
786-791
,共6页
刘俊秀%孙巧松%丰岩清%曾缨%赖蓉%陈曦%黄帆
劉俊秀%孫巧鬆%豐巖清%曾纓%賴蓉%陳晞%黃帆
류준수%손교송%봉암청%증영%뢰용%진희%황범
视神经脊髓炎%NMO-IgG%水通道蛋白4(AQP4)%HEK293
視神經脊髓炎%NMO-IgG%水通道蛋白4(AQP4)%HEK293
시신경척수염%NMO-IgG%수통도단백4(AQP4)%HEK293
[目的]建立一种可临床应用的并能稳定表达水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4,用于检测视神经脊髓炎患者血清中的AQP4抗体.[方法]构建有AQP4基因的表达载体,利用脂质体将载体转入HEK293细胞,G418筛选,RT-PCR、间接免疫荧光检测稳定细胞系中水通道蛋白4的表达及分布.细胞间接免疫荧光检测20例NMO患者、20例MS患者、30例健康对照血清中的AQP4抗体,并同鼠脑间接免疫荧光检测法比较.[结果]限制性酶切消化、PCR、测序结果证明载体构建成功.间接免疫荧光证实稳定细胞系中有AQP4表达.且主要分布在细胞膜上.20例NMO患者血清中11例NMO-IgG阳性,18例AQP4抗体阳性,滴度在1:60-1:15 360之间,而MS患者仅检测到1例阳性,健康对照未检测到阳性.[结论]成功构建稳定表达水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4,并检测出国人NMO患者血清中存在AQP4抗体,且敏感性高于鼠脑法,可以有效的鉴别视神经脊髓炎和多发性硬化.
[目的]建立一種可臨床應用的併能穩定錶達水通道蛋白4的胚腎細胞繫HEK293/AQP4,用于檢測視神經脊髓炎患者血清中的AQP4抗體.[方法]構建有AQP4基因的錶達載體,利用脂質體將載體轉入HEK293細胞,G418篩選,RT-PCR、間接免疫熒光檢測穩定細胞繫中水通道蛋白4的錶達及分佈.細胞間接免疫熒光檢測20例NMO患者、20例MS患者、30例健康對照血清中的AQP4抗體,併同鼠腦間接免疫熒光檢測法比較.[結果]限製性酶切消化、PCR、測序結果證明載體構建成功.間接免疫熒光證實穩定細胞繫中有AQP4錶達.且主要分佈在細胞膜上.20例NMO患者血清中11例NMO-IgG暘性,18例AQP4抗體暘性,滴度在1:60-1:15 360之間,而MS患者僅檢測到1例暘性,健康對照未檢測到暘性.[結論]成功構建穩定錶達水通道蛋白4的胚腎細胞繫HEK293/AQP4,併檢測齣國人NMO患者血清中存在AQP4抗體,且敏感性高于鼠腦法,可以有效的鑒彆視神經脊髓炎和多髮性硬化.
[목적]건립일충가림상응용적병능은정표체수통도단백4적배신세포계HEK293/AQP4,용우검측시신경척수염환자혈청중적AQP4항체.[방법]구건유AQP4기인적표체재체,이용지질체장재체전입HEK293세포,G418사선,RT-PCR、간접면역형광검측은정세포계중수통도단백4적표체급분포.세포간접면역형광검측20례NMO환자、20례MS환자、30례건강대조혈청중적AQP4항체,병동서뇌간접면역형광검측법비교.[결과]한제성매절소화、PCR、측서결과증명재체구건성공.간접면역형광증실은정세포계중유AQP4표체.차주요분포재세포막상.20례NMO환자혈청중11례NMO-IgG양성,18례AQP4항체양성,적도재1:60-1:15 360지간,이MS환자부검측도1례양성,건강대조미검측도양성.[결론]성공구건은정표체수통도단백4적배신세포계HEK293/AQP4,병검측출국인NMO환자혈청중존재AQP4항체,차민감성고우서뇌법,가이유효적감별시신경척수염화다발성경화.
