中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2011年
8期
688-690
,共3页
人MAP3K7基因%基因克隆%融合蛋白%原核表达
人MAP3K7基因%基因剋隆%融閤蛋白%原覈錶達
인MAP3K7기인%기인극륭%융합단백%원핵표체
目的 构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备.方法 通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序鉴定后,导入E.coli BL21宿主菌中,IPTG诱导表达融合蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定.结果 经测序鉴定成功构建了原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,诱导后的GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot检测到分子量正确的特异性蛋白条带,经纯化后,得到了高纯度的融合蛋白.结论成功构建了MAP3K7全长的GST重组表达载体,确定了GST-MAP3K7融合蛋白表达的最佳条件,诱导成功并得到了高纯度的融合蛋白,为进一步研究MAP3K7蛋白的生物学功能奠定了基础.
目的 構建MAP3K7蛋白GST的融閤錶達載體,高效錶達和純化GST-MAP3K7融閤蛋白,為GST Pulldown實驗做準備.方法 通過PCR擴增MAP3K7全長編碼基因,經雙酶切定嚮剋隆至錶達載體pGEX-5X-1,構建原覈重組錶達載體pGEX-5X-1-MAP3K7,通過酶切和測序鑒定後,導入E.coli BL21宿主菌中,IPTG誘導錶達融閤蛋白,經穀胱甘肽瓊脂糖凝膠純化錶達產物,SDS-PAGE和Western blot分析鑒定.結果 經測序鑒定成功構建瞭原覈重組錶達載體pGEX-5X-1-MAP3K7,誘導後的GST融閤蛋白經SDS-PAGE和Western blot檢測到分子量正確的特異性蛋白條帶,經純化後,得到瞭高純度的融閤蛋白.結論成功構建瞭MAP3K7全長的GST重組錶達載體,確定瞭GST-MAP3K7融閤蛋白錶達的最佳條件,誘導成功併得到瞭高純度的融閤蛋白,為進一步研究MAP3K7蛋白的生物學功能奠定瞭基礎.
목적 구건MAP3K7단백GST적융합표체재체,고효표체화순화GST-MAP3K7융합단백,위GST Pulldown실험주준비.방법 통과PCR확증MAP3K7전장편마기인,경쌍매절정향극륭지표체재체pGEX-5X-1,구건원핵중조표체재체pGEX-5X-1-MAP3K7,통과매절화측서감정후,도입E.coli BL21숙주균중,IPTG유도표체융합단백,경곡광감태경지당응효순화표체산물,SDS-PAGE화Western blot분석감정.결과 경측서감정성공구건료원핵중조표체재체pGEX-5X-1-MAP3K7,유도후적GST융합단백경SDS-PAGE화Western blot검측도분자량정학적특이성단백조대,경순화후,득도료고순도적융합단백.결론성공구건료MAP3K7전장적GST중조표체재체,학정료GST-MAP3K7융합단백표체적최가조건,유도성공병득도료고순도적융합단백,위진일보연구MAP3K7단백적생물학공능전정료기출.
