中国人兽共患病杂志
中國人獸共患病雜誌
중국인수공환병잡지
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2004年
8期
666-669
,共4页
孙红妹%包怡华%赵汉青%吴建新%刘哲伟%张霆%郭章溉%曹玉璞
孫紅妹%包怡華%趙漢青%吳建新%劉哲偉%張霆%郭章溉%曹玉璞
손홍매%포이화%조한청%오건신%류철위%장정%곽장개%조옥박
肺炎支原体%P1蛋白%表达
肺炎支原體%P1蛋白%錶達
폐염지원체%P1단백%표체
目的得到肺炎支原体主要粘附蛋白(P1蛋白)的表达蛋白.材料与方法用PCR产物限制性片段长度多肽性(RFLP)分析等方法鉴定实验用肺炎支原体菌株.针对P1蛋白基因设计上、下游引物,进行PCR扩增.对PCR产物进行回收、纯化,克隆入PET-28C(+)表达载体,并转化入宿主菌BL21.对重组质粒进行酶切及PCR鉴定后,IPTG诱导目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并以Ni-Agarose亲和层析柱纯化.结果1)本实验所用菌株为肺炎支原体2型.2)经PCR扩增得到预期含有BamHI和XhoI的533bp的目的片段.3)完成目的基因片段的克隆与表达,得到20kDa左右表达蛋白.经诱导阳性质粒的蛋白表达,得到较大量纯化的目的蛋白. 结论本研究以国际标准株FH为模板,成功获得纯化的近20kDa的P1蛋白片段,其大小与目的片段理论值相符,且此片段在肺炎支原体1型与2型中的基因同源性为98%.为在基因和蛋白水平进一步研究肺炎支原体P1蛋白成分在肺炎支原体粘附和引起机体免疫反应中的作用机制,打下了良好的基础.
目的得到肺炎支原體主要粘附蛋白(P1蛋白)的錶達蛋白.材料與方法用PCR產物限製性片段長度多肽性(RFLP)分析等方法鑒定實驗用肺炎支原體菌株.針對P1蛋白基因設計上、下遊引物,進行PCR擴增.對PCR產物進行迴收、純化,剋隆入PET-28C(+)錶達載體,併轉化入宿主菌BL21.對重組質粒進行酶切及PCR鑒定後,IPTG誘導目的蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達,併以Ni-Agarose親和層析柱純化.結果1)本實驗所用菌株為肺炎支原體2型.2)經PCR擴增得到預期含有BamHI和XhoI的533bp的目的片段.3)完成目的基因片段的剋隆與錶達,得到20kDa左右錶達蛋白.經誘導暘性質粒的蛋白錶達,得到較大量純化的目的蛋白. 結論本研究以國際標準株FH為模闆,成功穫得純化的近20kDa的P1蛋白片段,其大小與目的片段理論值相符,且此片段在肺炎支原體1型與2型中的基因同源性為98%.為在基因和蛋白水平進一步研究肺炎支原體P1蛋白成分在肺炎支原體粘附和引起機體免疫反應中的作用機製,打下瞭良好的基礎.
목적득도폐염지원체주요점부단백(P1단백)적표체단백.재료여방법용PCR산물한제성편단장도다태성(RFLP)분석등방법감정실험용폐염지원체균주.침대P1단백기인설계상、하유인물,진행PCR확증.대PCR산물진행회수、순화,극륭입PET-28C(+)표체재체,병전화입숙주균BL21.대중조질립진행매절급PCR감정후,IPTG유도목적단백재대장간균BL21(DE3)중표체,병이Ni-Agarose친화층석주순화.결과1)본실험소용균주위폐염지원체2형.2)경PCR확증득도예기함유BamHI화XhoI적533bp적목적편단.3)완성목적기인편단적극륭여표체,득도20kDa좌우표체단백.경유도양성질립적단백표체,득도교대량순화적목적단백. 결론본연구이국제표준주FH위모판,성공획득순화적근20kDa적P1단백편단,기대소여목적편단이론치상부,차차편단재폐염지원체1형여2형중적기인동원성위98%.위재기인화단백수평진일보연구폐염지원체P1단백성분재폐염지원체점부화인기궤체면역반응중적작용궤제,타하료량호적기출.
