CAJ | 학술논문

为了建立一种能够获得高纯度成年大鼠海马神经前体细胞(HPCs)的体外贴壁培养方法,并鉴定HPCs上是否存在功能性L-型钙通道,分离Wistar成年大鼠海马组织,制成单细胞悬液,利用无血清培养技术,在添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、N2和B27 supplement的DMEM/F12培养液中进行培养.连续传代,采用细胞免疫荧光法对第六代细胞进行鉴定,呈巢蛋白(nestin)阳性的细胞可达99.9%.把培养高纯度的细胞在分化培养基中诱导分化14天后,表现为神经元和星形胶质细胞的形态,且分别呈Ⅲ型β-微管蛋白(Tujl)阳性和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性.细胞免疫荧光和免疫印迹结果显示,HPCs表达L-型钙通道的Cav1.2α1C和Cav1.3α1D亚单位,共聚焦钙成像证明了功能性L-型钙通道的存在,并且利用全细胞膜片钳技术记录到了L-型钙电流.以上结果表明成年Wistar大鼠的海马HPCs可表达功能性的L-型钙通道.
위료건립일충능구획득고순도성년대서해마신경전체세포(HPCs)적체외첩벽배양방법,병감정HPCs상시부존재공능성L-형개통도,분리Wistar성년대서해마조직,제성단세포현액,이용무혈청배양기술,재첨가감성성섬유세포생장인자(bFGF)、표피생장인자(EGF)、N2화B27 supplement적DMEM/F12배양액중진행배양.련속전대,채용세포면역형광법대제륙대세포진행감정,정소단백(nestin)양성적세포가체99.9%.파배양고순도적세포재분화배양기중유도분화14천후,표현위신경원화성형효질세포적형태,차분별정Ⅲ형β-미관단백(Tujl)양성화효질섬유산성단백(GFAP)양성.세포면역형광화면역인적결과현시,HPCs표체L-형개통도적Cav1.2α1C화Cav1.3α1D아단위,공취초개성상증명료공능성L-형개통도적존재,병차이용전세포막편겸기술기록도료L-형개전류.이상결과표명성년Wistar대서적해마HPCs가표체공능성적L-형개통도.