高技术通讯
高技術通訊
고기술통신
HIGH TECHNOLOGY LETTERS
2006年
12期
1284-1288
,共5页
陆伟%梁爱敏%孟秀萍%顿宝庆%金丹%穆文超%林敏
陸偉%樑愛敏%孟秀萍%頓寶慶%金丹%穆文超%林敏
륙위%량애민%맹수평%돈보경%금단%목문초%림민
宏基因组%5-烯醇式丙酮莽草酰-3-磷酸合酶(EPSPS)%草甘膦
宏基因組%5-烯醇式丙酮莽草酰-3-燐痠閤酶(EPSPS)%草甘膦
굉기인조%5-희순식병동망초선-3-린산합매(EPSPS)%초감련
为探索利用宏基因组文库筛选草甘膦不敏感的5-烯醇式丙酮莽草酰-3-磷酸合酶(EPSPS)基因,直接从土壤中提取细菌DNA,构建草甘膦污染土壤细菌宏基因组文库,并利用EPSP合酶缺失突变株ER2799筛选到4个能互补EPSP合酶功能的克隆,其中两个克隆的转化子能够在含5mmol/L草甘膦的MOPS培养基上生长.测序结果表明它们均含有完整的EPSP合酶编码基因,GT-1aroA核苷酸长度为1335bp,编码445个氨基酸,GT-4aroA核苷酸长度为1350bp,编码450个氨基酸.利用PCR方法将两个基因克隆到原核表达载体pET28a上后,可以使宿主细胞BL21(DE3)在含100mmol/L草甘膦的MOPS培养基中良好生长.上述结果表明,利用宏基因组文库筛选方法可以得到高抗草甘膦的EPSPS基因.
為探索利用宏基因組文庫篩選草甘膦不敏感的5-烯醇式丙酮莽草酰-3-燐痠閤酶(EPSPS)基因,直接從土壤中提取細菌DNA,構建草甘膦汙染土壤細菌宏基因組文庫,併利用EPSP閤酶缺失突變株ER2799篩選到4箇能互補EPSP閤酶功能的剋隆,其中兩箇剋隆的轉化子能夠在含5mmol/L草甘膦的MOPS培養基上生長.測序結果錶明它們均含有完整的EPSP閤酶編碼基因,GT-1aroA覈苷痠長度為1335bp,編碼445箇氨基痠,GT-4aroA覈苷痠長度為1350bp,編碼450箇氨基痠.利用PCR方法將兩箇基因剋隆到原覈錶達載體pET28a上後,可以使宿主細胞BL21(DE3)在含100mmol/L草甘膦的MOPS培養基中良好生長.上述結果錶明,利用宏基因組文庫篩選方法可以得到高抗草甘膦的EPSPS基因.
위탐색이용굉기인조문고사선초감련불민감적5-희순식병동망초선-3-린산합매(EPSPS)기인,직접종토양중제취세균DNA,구건초감련오염토양세균굉기인조문고,병이용EPSP합매결실돌변주ER2799사선도4개능호보EPSP합매공능적극륭,기중량개극륭적전화자능구재함5mmol/L초감련적MOPS배양기상생장.측서결과표명타문균함유완정적EPSP합매편마기인,GT-1aroA핵감산장도위1335bp,편마445개안기산,GT-4aroA핵감산장도위1350bp,편마450개안기산.이용PCR방법장량개기인극륭도원핵표체재체pET28a상후,가이사숙주세포BL21(DE3)재함100mmol/L초감련적MOPS배양기중량호생장.상술결과표명,이용굉기인조문고사선방법가이득도고항초감련적EPSPS기인.
