中国农业科学
中國農業科學
중국농업과학
SCIENTIA AGRICULTURA SINICA
2007年
2期
385-390
,共6页
骆学农%郑亚东%窦永喜%郭爱疆%侯俊琳%景志忠%才学鹏
駱學農%鄭亞東%竇永喜%郭愛疆%侯俊琳%景誌忠%纔學鵬
락학농%정아동%두영희%곽애강%후준림%경지충%재학붕
猪带绦虫%45W-4BX%18kD%联合表达%免疫保护性分析
豬帶縚蟲%45W-4BX%18kD%聯閤錶達%免疫保護性分析
저대조충%45W-4BX%18kD%연합표체%면역보호성분석
[目的]获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原,为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础.[方法]PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列,经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BL21感受态细胞,酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆.测序正确的质粒经EcoR I和Not I酶切处理后与截去信号肽的18 kD基因连接,构建双基因融合表达载体pGEX-4BX/18.用IPTG诱导的表达产物,进行SDS-PAGE电泳、Western blot分析活性.分别用300μg重组GST-4BX、GST-4BX/18蛋白免疫猪,间接ELISA测定抗体水平.感染后90 d剖检计算各组的减虫率,比较评价重组抗原的免疫保护性.[结果]4BX/18 kD在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为50 kD的融合蛋白,并能被人囊虫和感染初期的猪囊虫阳性血清所识别.重组抗原免疫猪后45 d抗体达到峰值,联合表达重组抗原的减虫率为97%,GST-4BX免疫组的减虫率为95%.[结论]重组抗原4BX 和4BX/18kD均具有较好的免疫保护效果,有望利用它们研制出抗猪囊尾蚴病的高效疫苗.
[目的]穫得不同髮育階段基因聯閤錶達的具有良好免疫保護性的重組抗原,為研製高效的豬囊蟲基因工程疫苗奠定基礎.[方法]PCR擴增截去45W-4B基因的信號肽和C耑17箇疏水氨基痠序列,經BamH I和EcoR I酶切後與錶達載體pGEX-4T-1連接轉化BL21感受態細胞,酶切及PCR擴增鑒定暘性剋隆.測序正確的質粒經EcoR I和Not I酶切處理後與截去信號肽的18 kD基因連接,構建雙基因融閤錶達載體pGEX-4BX/18.用IPTG誘導的錶達產物,進行SDS-PAGE電泳、Western blot分析活性.分彆用300μg重組GST-4BX、GST-4BX/18蛋白免疫豬,間接ELISA測定抗體水平.感染後90 d剖檢計算各組的減蟲率,比較評價重組抗原的免疫保護性.[結果]4BX/18 kD在大腸桿菌中穫得高效錶達,錶達產物為50 kD的融閤蛋白,併能被人囊蟲和感染初期的豬囊蟲暘性血清所識彆.重組抗原免疫豬後45 d抗體達到峰值,聯閤錶達重組抗原的減蟲率為97%,GST-4BX免疫組的減蟲率為95%.[結論]重組抗原4BX 和4BX/18kD均具有較好的免疫保護效果,有望利用它們研製齣抗豬囊尾蚴病的高效疫苗.
[목적]획득불동발육계단기인연합표체적구유량호면역보호성적중조항원,위연제고효적저낭충기인공정역묘전정기출.[방법]PCR확증절거45W-4B기인적신호태화C단17개소수안기산서렬,경BamH I화EcoR I매절후여표체재체pGEX-4T-1련접전화BL21감수태세포,매절급PCR확증감정양성극륭.측서정학적질립경EcoR I화Not I매절처리후여절거신호태적18 kD기인련접,구건쌍기인융합표체재체pGEX-4BX/18.용IPTG유도적표체산물,진행SDS-PAGE전영、Western blot분석활성.분별용300μg중조GST-4BX、GST-4BX/18단백면역저,간접ELISA측정항체수평.감염후90 d부검계산각조적감충솔,비교평개중조항원적면역보호성.[결과]4BX/18 kD재대장간균중획득고효표체,표체산물위50 kD적융합단백,병능피인낭충화감염초기적저낭충양성혈청소식별.중조항원면역저후45 d항체체도봉치,연합표체중조항원적감충솔위97%,GST-4BX면역조적감충솔위95%.[결론]중조항원4BX 화4BX/18kD균구유교호적면역보호효과,유망이용타문연제출항저낭미유병적고효역묘.
