CAJ | 학술논문

目的:研究慢病毒介导RNAi致bcr/abl基因长期沉默对K562白血病细胞各种生物学特性的影响. 方法:构建含bcr/abl RNAi序列的pNL-B/A-EGFP慢病毒重组质粒载体并包装病毒,感染K562细胞,挑取稳定转化的克隆(B/A-K562).Real-time PCR及Western blotting验证干扰效应;锥虫蓝染色、集落形成实验检测细胞增殖能力变化;联苯胺染色观察细胞分化;ELISA法检测酪氨酸激酶活性;AO-EB染色观察细胞凋亡;比色法检测Caspase-3、Caspase-9活性;以上检测均以K562细胞和转染空质粒EGFP-K562作对照. 结果:成功构建bcr/abl基因RNAi稳定转染的B/A-K562细胞, Real-time PCR及Western blotting证实B/A-K562细胞中bcr/abl mRNA及P210bcr/abl蛋白含量明显下调.bcr/abl基因稳定下调后,K562细胞倍增时间明显延长(37.1 vs 20.4、23.3 h)、集落形成能力减弱(P<0.01),K562细胞向红系分化,酪氨酸激酶活性下降(P<0.01),自发凋亡率显著提高(P<0.01),细胞中Caspase-3(P<0.05)及Caspase-9(P<0.01)活性明显提高.结论:慢病毒介导的RNAi能实现bcr/abl基因长期沉默,从而抑制K562细胞恶性增殖,诱导其分化及凋亡.
목적:연구만병독개도RNAi치bcr/abl기인장기침묵대K562백혈병세포각충생물학특성적영향. 방법:구건함bcr/abl RNAi서렬적pNL-B/A-EGFP만병독중조질립재체병포장병독,감염K562세포,도취은정전화적극륭(B/A-K562).Real-time PCR급Western blotting험증간우효응;추충람염색、집락형성실험검측세포증식능력변화;련분알염색관찰세포분화;ELISA법검측락안산격매활성;AO-EB염색관찰세포조망;비색법검측Caspase-3、Caspase-9활성;이상검측균이K562세포화전염공질립EGFP-K562작대조. 결과:성공구건bcr/abl기인RNAi은정전염적B/A-K562세포, Real-time PCR급Western blotting증실B/A-K562세포중bcr/abl mRNA급P210bcr/abl단백함량명현하조.bcr/abl기인은정하조후,K562세포배증시간명현연장(37.1 vs 20.4、23.3 h)、집락형성능력감약(P<0.01),K562세포향홍계분화,락안산격매활성하강(P<0.01),자발조망솔현저제고(P<0.01),세포중Caspase-3(P<0.05)급Caspase-9(P<0.01)활성명현제고.결론:만병독개도적RNAi능실현bcr/abl기인장기침묵,종이억제K562세포악성증식,유도기분화급조망.