中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2009年
5期
1278-1282
,共5页
腺病毒载体%短发夹RNA%k562细胞系
腺病毒載體%短髮夾RNA%k562細胞繫
선병독재체%단발협RNA%k562세포계
近年来发展了一些质粒载体介导shRNA的转录,然后在细胞酶的作用下加工成功能性的siRNAs.虽然这些载体较化学合成的siRNA有更多的优点.但仍存在相当多的缺点,如转染效率低和不能在体内使用.本研究建立一种没有上述缺点的腺病毒递送BmihRNAs系统,设计靶向人Bmi-1的载体.以pAdTrack CMV质粒为模板扩增CMV-GFP表达盒,从pGEIBMIhRNA质粒上酶切下U6-BMI-1 shRNA表达盒,克隆它们入穿梭质粒pShuttle中,然后与pAdEasy-1质粒基因重组产生腺病毒质粒pAd-BMIhRNA-CVM-GFP,转染293A包装细胞,收获病毒.病毒感染K562细胞后,在mRNA和蛋白水平上分别用Real Time-PCR和Westem blot检测BMI的表达水平.结果表明:成功构建了pGEIBMIhRNA腺病毒质粒并有效包装出病毒.感染BmihRNA腺病毒的K562细胞在mRNA和蛋白水平上均显著下调了Bmi-1的表达,而时照病毒没有明显的效果.结论:腺病毒是一种有效递送siRNA入哺乳动物细胞的载体.腺病毒递送siRNA载体可能成为siRNA药物的基因治疗载体.
近年來髮展瞭一些質粒載體介導shRNA的轉錄,然後在細胞酶的作用下加工成功能性的siRNAs.雖然這些載體較化學閤成的siRNA有更多的優點.但仍存在相噹多的缺點,如轉染效率低和不能在體內使用.本研究建立一種沒有上述缺點的腺病毒遞送BmihRNAs繫統,設計靶嚮人Bmi-1的載體.以pAdTrack CMV質粒為模闆擴增CMV-GFP錶達盒,從pGEIBMIhRNA質粒上酶切下U6-BMI-1 shRNA錶達盒,剋隆它們入穿梭質粒pShuttle中,然後與pAdEasy-1質粒基因重組產生腺病毒質粒pAd-BMIhRNA-CVM-GFP,轉染293A包裝細胞,收穫病毒.病毒感染K562細胞後,在mRNA和蛋白水平上分彆用Real Time-PCR和Westem blot檢測BMI的錶達水平.結果錶明:成功構建瞭pGEIBMIhRNA腺病毒質粒併有效包裝齣病毒.感染BmihRNA腺病毒的K562細胞在mRNA和蛋白水平上均顯著下調瞭Bmi-1的錶達,而時照病毒沒有明顯的效果.結論:腺病毒是一種有效遞送siRNA入哺乳動物細胞的載體.腺病毒遞送siRNA載體可能成為siRNA藥物的基因治療載體.
근년래발전료일사질립재체개도shRNA적전록,연후재세포매적작용하가공성공능성적siRNAs.수연저사재체교화학합성적siRNA유경다적우점.단잉존재상당다적결점,여전염효솔저화불능재체내사용.본연구건립일충몰유상술결점적선병독체송BmihRNAs계통,설계파향인Bmi-1적재체.이pAdTrack CMV질립위모판확증CMV-GFP표체합,종pGEIBMIhRNA질립상매절하U6-BMI-1 shRNA표체합,극륭타문입천사질립pShuttle중,연후여pAdEasy-1질립기인중조산생선병독질립pAd-BMIhRNA-CVM-GFP,전염293A포장세포,수획병독.병독감염K562세포후,재mRNA화단백수평상분별용Real Time-PCR화Westem blot검측BMI적표체수평.결과표명:성공구건료pGEIBMIhRNA선병독질립병유효포장출병독.감염BmihRNA선병독적K562세포재mRNA화단백수평상균현저하조료Bmi-1적표체,이시조병독몰유명현적효과.결론:선병독시일충유효체송siRNA입포유동물세포적재체.선병독체송siRNA재체가능성위siRNA약물적기인치료재체.
