癌变·畸变·突变
癌變·畸變·突變
암변·기변·돌변
CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
2010年
3期
182-185
,共4页
邱实%蔡云%高兴%顾寿智%刘泽军
邱實%蔡雲%高興%顧壽智%劉澤軍
구실%채운%고흥%고수지%류택군
p53多态%定点诱变%重叠延伸PCR
p53多態%定點誘變%重疊延伸PCR
p53다태%정점유변%중첩연신PCR
目的:为了研究p53 codon 72多态的功能,采用定点诱变法构建人p53基因的多态质粒.方法:设计带有突变碱基的引物,通过PCR扩增引入突变碱基,再将突变后的p53序列插入载体中.经测序确定所扩增的DNA序列,并用体外转录翻译系统制备p53蛋白和iASPP蛋白,免疫沉淀法检测蛋白相互作用.结果:通过PCR获得的含突变碱基的p53序列经连接后插入真核表达载体pReceiver-M01中,构建了p53多态位点为72Arg的表达质粒pReceiver-M01-p53(Arg72).测序证明序列正确,表达的p53蛋白能与iASPP相互作用,具有生物学功能.结论:成功构建了p53多态(72Arg)真核表达载体,为进一步深入研究p53多态的生物学功能奠定了基础.
目的:為瞭研究p53 codon 72多態的功能,採用定點誘變法構建人p53基因的多態質粒.方法:設計帶有突變堿基的引物,通過PCR擴增引入突變堿基,再將突變後的p53序列插入載體中.經測序確定所擴增的DNA序列,併用體外轉錄翻譯繫統製備p53蛋白和iASPP蛋白,免疫沉澱法檢測蛋白相互作用.結果:通過PCR穫得的含突變堿基的p53序列經連接後插入真覈錶達載體pReceiver-M01中,構建瞭p53多態位點為72Arg的錶達質粒pReceiver-M01-p53(Arg72).測序證明序列正確,錶達的p53蛋白能與iASPP相互作用,具有生物學功能.結論:成功構建瞭p53多態(72Arg)真覈錶達載體,為進一步深入研究p53多態的生物學功能奠定瞭基礎.
목적:위료연구p53 codon 72다태적공능,채용정점유변법구건인p53기인적다태질립.방법:설계대유돌변감기적인물,통과PCR확증인입돌변감기,재장돌변후적p53서렬삽입재체중.경측서학정소확증적DNA서렬,병용체외전록번역계통제비p53단백화iASPP단백,면역침정법검측단백상호작용.결과:통과PCR획득적함돌변감기적p53서렬경련접후삽입진핵표체재체pReceiver-M01중,구건료p53다태위점위72Arg적표체질립pReceiver-M01-p53(Arg72).측서증명서렬정학,표체적p53단백능여iASPP상호작용,구유생물학공능.결론:성공구건료p53다태(72Arg)진핵표체재체,위진일보심입연구p53다태적생물학공능전정료기출.
