癌变·畸变·突变
癌變·畸變·突變
암변·기변·돌변
CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
2011年
4期
245-249
,共5页
吴健谊%蒋太峰%谢剑君%张锴%杜则澎%许丽艳
吳健誼%蔣太峰%謝劍君%張鍇%杜則澎%許麗豔
오건의%장태봉%사검군%장개%두칙팽%허려염
CDK2%基因克隆%真核表达载体
CDK2%基因剋隆%真覈錶達載體
CDK2%기인극륭%진핵표체재체
目的:构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在哺乳动物细胞的表达载体,为研究CDK2的功能和修饰提供实验材料.方法:从食管癌细胞中提取总RNA,逆转录PCR扩增CDK2编码区,然后将PCR产物克隆到T载体；扩增后的CDK2片段分别亚克隆入pcDNA3、pcDNA4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体；最后,将获得的表达载体PEGFP/CDK2转染小鼠成纤维细胞NIH3T3进行初步的CDK2表达分析.结果:RT-PCR扩增获得约900 bp的目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析,显示重组片段是人CDK2基因序列；CDK2片段分别亚克隆入上述4种载体后获得相应表达载体；运用构建的PEGFP/CDK2表达载体,在NIH3T3细胞中表达出CDK2蛋白.结论:成功构建了CDK2的哺乳动物细胞系列表达载体,并在NIH3T3细胞中成功表达目的蛋白.
目的:構建一繫列細胞週期蛋白依賴激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在哺乳動物細胞的錶達載體,為研究CDK2的功能和脩飾提供實驗材料.方法:從食管癌細胞中提取總RNA,逆轉錄PCR擴增CDK2編碼區,然後將PCR產物剋隆到T載體；擴增後的CDK2片段分彆亞剋隆入pcDNA3、pcDNA4、pNTAP和pEGFP等4種哺乳動物錶達載體；最後,將穫得的錶達載體PEGFP/CDK2轉染小鼠成纖維細胞NIH3T3進行初步的CDK2錶達分析.結果:RT-PCR擴增穫得約900 bp的目的片段,經T載體剋隆和DNA序列分析,顯示重組片段是人CDK2基因序列；CDK2片段分彆亞剋隆入上述4種載體後穫得相應錶達載體；運用構建的PEGFP/CDK2錶達載體,在NIH3T3細胞中錶達齣CDK2蛋白.結論:成功構建瞭CDK2的哺乳動物細胞繫列錶達載體,併在NIH3T3細胞中成功錶達目的蛋白.
목적:구건일계렬세포주기단백의뢰격매2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)재포유동물세포적표체재체,위연구CDK2적공능화수식제공실험재료.방법:종식관암세포중제취총RNA,역전록PCR확증CDK2편마구,연후장PCR산물극륭도T재체；확증후적CDK2편단분별아극륭입pcDNA3、pcDNA4、pNTAP화pEGFP등4충포유동물표체재체；최후,장획득적표체재체PEGFP/CDK2전염소서성섬유세포NIH3T3진행초보적CDK2표체분석.결과:RT-PCR확증획득약900 bp적목적편단,경T재체극륭화DNA서렬분석,현시중조편단시인CDK2기인서렬；CDK2편단분별아극륭입상술4충재체후획득상응표체재체；운용구건적PEGFP/CDK2표체재체,재NIH3T3세포중표체출CDK2단백.결론:성공구건료CDK2적포유동물세포계렬표체재체,병재NIH3T3세포중성공표체목적단백.
