CAJ | 학술논문

目的:比较二维法和三维法体外诱导小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)分化为高纯度内皮细胞(endothelial cell,EC)的效率.方法:分别用二维法和三维法体外诱导小鼠ESC向EC定向分化,以胎肝激酶-1(fetal liver kinase 1,Flk-1)作为标志物进行流式分选;增加血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度并对阳性细胞加以人工分选以进一步纯化.评估两种方法诱导的分化效率,并采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、免疫荧光法及DiI标记的乙酰化的低密度脂蛋白(DiI-Ac-LDL)吞噬试验等方法来评估ESC来源的EC(ES-DEC)的生物学行为.结果:二维法流式分选的Flk-1阳性细胞比例显著高于三维法(P＜0.05).Flk-1阳性细胞在二维培养体系中呈现鹅卵石样的内皮样细胞和条索状的平滑肌样细胞,经人工分选和纯化后可得到高纯度的形态单一的并可传代培养的ESDEC.两种方法分化的ESDEC均可形成管状结构、表达EC特异性细胞表面标志物,并且DiI-ac-LDL吞噬实验阳性.结论:两种方法均可诱导小鼠ESC定向分化为EC,二维法更为简单有效.增加VEGF浓度并对Flk-1阳性细胞进行人工分选有助于纯化ESDEC.
목적:비교이유법화삼유법체외유도소서배태간세포(embryonic stem cell,ESC)분화위고순도내피세포(endothelial cell,EC)적효솔.방법:분별용이유법화삼유법체외유도소서ESC향EC정향분화,이태간격매-1(fetal liver kinase 1,Flk-1)작위표지물진행류식분선;증가혈관내피생장인자(vascular endothelial growth factor,VEGF)농도병대양성세포가이인공분선이진일보순화.평고량충방법유도적분화효솔,병채용반전록-취합매련반응(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、면역형광법급DiI표기적을선화적저밀도지단백(DiI-Ac-LDL)탄서시험등방법래평고ESC래원적EC(ES-DEC)적생물학행위.결과:이유법류식분선적Flk-1양성세포비례현저고우삼유법(P＜0.05).Flk-1양성세포재이유배양체계중정현아란석양적내피양세포화조색상적평활기양세포,경인공분선화순화후가득도고순도적형태단일적병가전대배양적ESDEC.량충방법분화적ESDEC균가형성관상결구、표체EC특이성세포표면표지물,병차DiI-ac-LDL탄서실험양성.결론:량충방법균가유도소서ESC정향분화위EC,이유법경위간단유효.증가VEGF농도병대Flk-1양성세포진행인공분선유조우순화ESDEC.