农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2011年
1期
85-92
,共8页
余义和%徐伟荣%李树秀%黎涛%王跃进
餘義和%徐偉榮%李樹秀%黎濤%王躍進
여의화%서위영%리수수%려도%왕약진
华东葡萄%融合表达%转录因子%VpRFP1%多克隆抗体
華東葡萄%融閤錶達%轉錄因子%VpRFP1%多剋隆抗體
화동포도%융합표체%전록인자%VpRFP1%다극륭항체
为揭示中国野生华东葡萄抗病转录因子基因在与葡萄白粉病互作过程中的作用机制,本研究以中国野生华东葡萄(Vitis pseudoreticulata W.T.Wang)高抗葡萄白粉病株系白河35-1为材料,接种葡萄白粉病菌(Unicinula necator(Schw.)Burr.)病原菌诱导后7个不同时期的反转录产物为模板,用RT-PCR扩增得到V.pseudoreticulata RING-finger protein1基因(VpRFP1)的开放阅读框1 053 bp;将其克隆到pMD19-T载体经测序后,亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体并转化大肠杆菌(Escherichicacoli)BL21;经WTG诱导表达出64kD的融合蛋白GST-VpRFP1,主要以包涵体表达形式存在;采用电透析法纯化融合蛋白,并以纯化产物免疫新西兰大白兔获得抗血清,Westem blot检测免疫.抗原反应良好.本研究结果表明,在27℃、0.1 mmol/L的IPTG诱导4 h融合蛋白GST-VpRFP1的表达量最大,免疫大白兔获得的抗血清能够用于VpRFP1基因的功能分析.
為揭示中國野生華東葡萄抗病轉錄因子基因在與葡萄白粉病互作過程中的作用機製,本研究以中國野生華東葡萄(Vitis pseudoreticulata W.T.Wang)高抗葡萄白粉病株繫白河35-1為材料,接種葡萄白粉病菌(Unicinula necator(Schw.)Burr.)病原菌誘導後7箇不同時期的反轉錄產物為模闆,用RT-PCR擴增得到V.pseudoreticulata RING-finger protein1基因(VpRFP1)的開放閱讀框1 053 bp;將其剋隆到pMD19-T載體經測序後,亞剋隆到pGEX-4T-1原覈錶達載體併轉化大腸桿菌(Escherichicacoli)BL21;經WTG誘導錶達齣64kD的融閤蛋白GST-VpRFP1,主要以包涵體錶達形式存在;採用電透析法純化融閤蛋白,併以純化產物免疫新西蘭大白兔穫得抗血清,Westem blot檢測免疫.抗原反應良好.本研究結果錶明,在27℃、0.1 mmol/L的IPTG誘導4 h融閤蛋白GST-VpRFP1的錶達量最大,免疫大白兔穫得的抗血清能夠用于VpRFP1基因的功能分析.
위게시중국야생화동포도항병전록인자기인재여포도백분병호작과정중적작용궤제,본연구이중국야생화동포도(Vitis pseudoreticulata W.T.Wang)고항포도백분병주계백하35-1위재료,접충포도백분병균(Unicinula necator(Schw.)Burr.)병원균유도후7개불동시기적반전록산물위모판,용RT-PCR확증득도V.pseudoreticulata RING-finger protein1기인(VpRFP1)적개방열독광1 053 bp;장기극륭도pMD19-T재체경측서후,아극륭도pGEX-4T-1원핵표체재체병전화대장간균(Escherichicacoli)BL21;경WTG유도표체출64kD적융합단백GST-VpRFP1,주요이포함체표체형식존재;채용전투석법순화융합단백,병이순화산물면역신서란대백토획득항혈청,Westem blot검측면역.항원반응량호.본연구결과표명,재27℃、0.1 mmol/L적IPTG유도4 h융합단백GST-VpRFP1적표체량최대,면역대백토획득적항혈청능구용우VpRFP1기인적공능분석.
