厦门大学学报（自然科学版）
廈門大學學報（自然科學版）
하문대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF XIAMEN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2007年
2期
244-247
,共4页
杨听林%左正宏%蔡嘉力%王重刚%陈奕欣
楊聽林%左正宏%蔡嘉力%王重剛%陳奕訢
양은림%좌정굉%채가력%왕중강%진혁흔
坛紫菜%别藻蓝蛋白%原核表达%Western-blot
罈紫菜%彆藻藍蛋白%原覈錶達%Western-blot
단자채%별조람단백%원핵표체%Western-blot
根据GenBank(AY372218)中的相关序列设计引物,通过PCR的方法从质粒pMD-apcAB中扩增坛紫菜别藻蓝蛋白β亚基基因(apcB),并将其克隆到高效表达外源基因的原核表达质粒pTO-T7.将构建好的质粒导入表达型大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对表达产物进行Western-blot和质谱鉴定.结果显示:apcB全长486 bp,表达的坛紫菜别藻蓝蛋白β亚基(APCβ)为带有原核表达载体T7g10的12个起始氨基酸的融合蛋白,其分子量约为18.0 ku.扫描分析的结果表明,0.5 mmol/L的IPTG在37℃诱导6 h时,APCβ的表达量达到最大,达菌体总蛋白40%以上.Western-blot和质谱鉴定的结果表明获得的融合蛋白为重组坛紫菜别藻蓝蛋白β亚基.
根據GenBank(AY372218)中的相關序列設計引物,通過PCR的方法從質粒pMD-apcAB中擴增罈紫菜彆藻藍蛋白β亞基基因(apcB),併將其剋隆到高效錶達外源基因的原覈錶達質粒pTO-T7.將構建好的質粒導入錶達型大腸桿菌BL21(DE3),異丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,併對錶達產物進行Western-blot和質譜鑒定.結果顯示:apcB全長486 bp,錶達的罈紫菜彆藻藍蛋白β亞基(APCβ)為帶有原覈錶達載體T7g10的12箇起始氨基痠的融閤蛋白,其分子量約為18.0 ku.掃描分析的結果錶明,0.5 mmol/L的IPTG在37℃誘導6 h時,APCβ的錶達量達到最大,達菌體總蛋白40%以上.Western-blot和質譜鑒定的結果錶明穫得的融閤蛋白為重組罈紫菜彆藻藍蛋白β亞基.
근거GenBank(AY372218)중적상관서렬설계인물,통과PCR적방법종질립pMD-apcAB중확증단자채별조람단백β아기기인(apcB),병장기극륭도고효표체외원기인적원핵표체질립pTO-T7.장구건호적질립도입표체형대장간균BL21(DE3),이병기-β-D류대반유당감(IPTG)유도표체,병대표체산물진행Western-blot화질보감정.결과현시:apcB전장486 bp,표체적단자채별조람단백β아기(APCβ)위대유원핵표체재체T7g10적12개기시안기산적융합단백,기분자량약위18.0 ku.소묘분석적결과표명,0.5 mmol/L적IPTG재37℃유도6 h시,APCβ적표체량체도최대,체균체총단백40%이상.Western-blot화질보감정적결과표명획득적융합단백위중조단자채별조람단백β아기.
