上海口腔医学
上海口腔醫學
상해구강의학
SHANGHAI JOURNAL OF STOMATOLOGY
2008年
1期
40-44
,共5页
于光%束蓉%孙颖%程岚%宋忠臣%张秀丽
于光%束蓉%孫穎%程嵐%宋忠臣%張秀麗
우광%속용%손영%정람%송충신%장수려
釉原蛋白%重组慢病毒载体%牙周膜细胞%感染
釉原蛋白%重組慢病毒載體%牙週膜細胞%感染
유원단백%중조만병독재체%아주막세포%감염
目的:构建含有人釉原蛋白(human amelogenin,hAm)基因的慢病毒载体质粒,用重组慢病毒感染人牙周膜细胞(Human periodontal ligament cells,hPDLCs),初步探讨釉原蛋白基因修饰种子细胞用于牙周组织工程修复的可行性.方法:采用RT-PCR方法获取hAm编码基因,构建慢病毒载体质粒FUAmW,重组质粒经双酶切及测序鉴定.聚乙烯亚胺(polytheylenimine,PEI)法三质粒共转染293T细胞,获取重组慢病毒FUAmW FUGW,感染hPDLCs,应用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(green fluoreseene protein,GFP)表达,流式细胞仪flow cvtometer,FCM)检测慢病毒载体转染效率.通过RT-PCR检测hPDLC中hAm基因的表达.结果:测序证实,RT-PCR产物序列与Genebank公布的Am编码序列一致,双酶切证实目的片段插入重组质粒.293T细胞及hPDLCs感染72h后.荧光显微镜下可见绿色荧光.FCM测得GFP感染2种细胞的阳性率分别为69.46%和33.99%.RT-PCR证实重组慢病毒FUAmW感染的细胞能表达hAm基因.结论:成功构建含有人釉原蛋白基因的慢病毒载体质粒,经293T细胞包装.得到重组慢病毒可感染牙周膜细胞.
目的:構建含有人釉原蛋白(human amelogenin,hAm)基因的慢病毒載體質粒,用重組慢病毒感染人牙週膜細胞(Human periodontal ligament cells,hPDLCs),初步探討釉原蛋白基因脩飾種子細胞用于牙週組織工程脩複的可行性.方法:採用RT-PCR方法穫取hAm編碼基因,構建慢病毒載體質粒FUAmW,重組質粒經雙酶切及測序鑒定.聚乙烯亞胺(polytheylenimine,PEI)法三質粒共轉染293T細胞,穫取重組慢病毒FUAmW FUGW,感染hPDLCs,應用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白(green fluoreseene protein,GFP)錶達,流式細胞儀flow cvtometer,FCM)檢測慢病毒載體轉染效率.通過RT-PCR檢測hPDLC中hAm基因的錶達.結果:測序證實,RT-PCR產物序列與Genebank公佈的Am編碼序列一緻,雙酶切證實目的片段插入重組質粒.293T細胞及hPDLCs感染72h後.熒光顯微鏡下可見綠色熒光.FCM測得GFP感染2種細胞的暘性率分彆為69.46%和33.99%.RT-PCR證實重組慢病毒FUAmW感染的細胞能錶達hAm基因.結論:成功構建含有人釉原蛋白基因的慢病毒載體質粒,經293T細胞包裝.得到重組慢病毒可感染牙週膜細胞.
목적:구건함유인유원단백(human amelogenin,hAm)기인적만병독재체질립,용중조만병독감염인아주막세포(Human periodontal ligament cells,hPDLCs),초보탐토유원단백기인수식충자세포용우아주조직공정수복적가행성.방법:채용RT-PCR방법획취hAm편마기인,구건만병독재체질립FUAmW,중조질립경쌍매절급측서감정.취을희아알(polytheylenimine,PEI)법삼질립공전염293T세포,획취중조만병독FUAmW FUGW,감염hPDLCs,응용형광현미경관찰록색형광단백(green fluoreseene protein,GFP)표체,류식세포의flow cvtometer,FCM)검측만병독재체전염효솔.통과RT-PCR검측hPDLC중hAm기인적표체.결과:측서증실,RT-PCR산물서렬여Genebank공포적Am편마서렬일치,쌍매절증실목적편단삽입중조질립.293T세포급hPDLCs감염72h후.형광현미경하가견록색형광.FCM측득GFP감염2충세포적양성솔분별위69.46%화33.99%.RT-PCR증실중조만병독FUAmW감염적세포능표체hAm기인.결론:성공구건함유인유원단백기인적만병독재체질립,경293T세포포장.득도중조만병독가감염아주막세포.
