药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2008年
1期
35-39
,共5页
唐治华%应跃斌%江海燕%黄敏芬%罗家立%陈枢青
唐治華%應躍斌%江海燕%黃敏芬%囉傢立%陳樞青
당치화%응약빈%강해연%황민분%라가립%진추청
重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白%CHO细胞%氨基酸%流加-批式%代谢
重組人腫瘤壞死因子受體-Fc融閤蛋白%CHO細胞%氨基痠%流加-批式%代謝
중조인종류배사인자수체-Fc융합단백%CHO세포%안기산%류가-비식%대사
为提高表达重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(rhTNFR-Fc)的CHO工程细胞的培养密度和目的蛋白表达,研究了葡萄糖和谷氨酰胺流加-批式培养工艺的细胞氨基酸代谢特征及游离氨基酸和大豆蛋白水解物的补加策略.通过补加葡萄糖和谷氨酰胺浓缩液分别维持其浓度为10 mmol/L和2 mmol/L左右,在不同阶段定期补加特定的氨基酸浓缩液或大豆蛋白水解物补充氨基酸消耗,检测细胞培养上清中rhTNFR-Fc的表达.谷氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、脯氨酸等4种非必需氨基酸快速消耗,是CHO工程细胞增殖和目的蛋白表达的限制性底物.以游离氨基酸、游离氨基酸合并大豆蛋白水解物补充氨基酸消耗可分别使细胞生长密度提高50%、100%,目的蛋白表达增加60%、125%,培养时程延长44%、66%,同时葡萄糖比消耗率、乳酸比生成率降低,谷氨酰胺的利用效率提高.
為提高錶達重組人腫瘤壞死因子受體-Fc融閤蛋白(rhTNFR-Fc)的CHO工程細胞的培養密度和目的蛋白錶達,研究瞭葡萄糖和穀氨酰胺流加-批式培養工藝的細胞氨基痠代謝特徵及遊離氨基痠和大豆蛋白水解物的補加策略.通過補加葡萄糖和穀氨酰胺濃縮液分彆維持其濃度為10 mmol/L和2 mmol/L左右,在不同階段定期補加特定的氨基痠濃縮液或大豆蛋白水解物補充氨基痠消耗,檢測細胞培養上清中rhTNFR-Fc的錶達.穀氨痠、天鼕酰胺、天鼕氨痠、脯氨痠等4種非必需氨基痠快速消耗,是CHO工程細胞增殖和目的蛋白錶達的限製性底物.以遊離氨基痠、遊離氨基痠閤併大豆蛋白水解物補充氨基痠消耗可分彆使細胞生長密度提高50%、100%,目的蛋白錶達增加60%、125%,培養時程延長44%、66%,同時葡萄糖比消耗率、乳痠比生成率降低,穀氨酰胺的利用效率提高.
위제고표체중조인종류배사인자수체-Fc융합단백(rhTNFR-Fc)적CHO공정세포적배양밀도화목적단백표체,연구료포도당화곡안선알류가-비식배양공예적세포안기산대사특정급유리안기산화대두단백수해물적보가책략.통과보가포도당화곡안선알농축액분별유지기농도위10 mmol/L화2 mmol/L좌우,재불동계단정기보가특정적안기산농축액혹대두단백수해물보충안기산소모,검측세포배양상청중rhTNFR-Fc적표체.곡안산、천동선알、천동안산、포안산등4충비필수안기산쾌속소모,시CHO공정세포증식화목적단백표체적한제성저물.이유리안기산、유리안기산합병대두단백수해물보충안기산소모가분별사세포생장밀도제고50%、100%,목적단백표체증가60%、125%,배양시정연장44%、66%,동시포도당비소모솔、유산비생성솔강저,곡안선알적이용효솔제고.
