中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2010年
33期
6125-6128
,共4页
袁芳%刘映红%田俊玮%陈俊香%刘伏友
袁芳%劉映紅%田俊瑋%陳俊香%劉伏友
원방%류영홍%전준위%진준향%류복우
脂联素%pIRES2-EGFP载体%阳离子脂质体%基因转染%肾脏
脂聯素%pIRES2-EGFP載體%暘離子脂質體%基因轉染%腎髒
지련소%pIRES2-EGFP재체%양리자지질체%기인전염%신장
背景:已有研究证实经腹腔注射基因转染肾脏是一种简便有效的实验方法.目的:构建表达球形脂联素(gAd)的pIRES2-EGFP-gAd质粒,观察其在大鼠肾脏的表达.方法:以pET/gAd质粒为模板,PCR扩增目的片段,转化大肠杆菌,用EcoR Ⅰ BamH Ⅰ双酶切后,与pIRES2-EGFP荧光质粒连接,重组构建pIRES2-EGFP-gAd质粒.将构建成功的pIRES2-EGFP-gAd质粒采用脂质体介导经腹腔注射正常大鼠体内,于注射24,48,96 h和7 d留取肾脏标本进行冰冻切片,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在肾组织中的表达,同时采用Western bot检测肾组织绿色荧光蛋白的表达.结果与结论:重组构建的pIRES2-EGFP-gAd载体经双酶切电泳分析及DNA测序证实无碱基突变.在腹腔注射脂质体/pIRES2-EGFP-gAd转染复合物24 h,即可在肾小球肾间质检测到绿色荧光,注射48 h,荧光进一步增强,之后逐渐减弱,至注射7 d时,荧光强度明显减弱.Western bot检测的绿色荧光蛋白的表达结果与冰冻组织切片结果一致.说明脂质体能够介导pIRES2-EGFP-gAd真核载体在大鼠肾脏表达.
揹景:已有研究證實經腹腔註射基因轉染腎髒是一種簡便有效的實驗方法.目的:構建錶達毬形脂聯素(gAd)的pIRES2-EGFP-gAd質粒,觀察其在大鼠腎髒的錶達.方法:以pET/gAd質粒為模闆,PCR擴增目的片段,轉化大腸桿菌,用EcoR Ⅰ BamH Ⅰ雙酶切後,與pIRES2-EGFP熒光質粒連接,重組構建pIRES2-EGFP-gAd質粒.將構建成功的pIRES2-EGFP-gAd質粒採用脂質體介導經腹腔註射正常大鼠體內,于註射24,48,96 h和7 d留取腎髒標本進行冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白在腎組織中的錶達,同時採用Western bot檢測腎組織綠色熒光蛋白的錶達.結果與結論:重組構建的pIRES2-EGFP-gAd載體經雙酶切電泳分析及DNA測序證實無堿基突變.在腹腔註射脂質體/pIRES2-EGFP-gAd轉染複閤物24 h,即可在腎小毬腎間質檢測到綠色熒光,註射48 h,熒光進一步增彊,之後逐漸減弱,至註射7 d時,熒光彊度明顯減弱.Western bot檢測的綠色熒光蛋白的錶達結果與冰凍組織切片結果一緻.說明脂質體能夠介導pIRES2-EGFP-gAd真覈載體在大鼠腎髒錶達.
배경:이유연구증실경복강주사기인전염신장시일충간편유효적실험방법.목적:구건표체구형지련소(gAd)적pIRES2-EGFP-gAd질립,관찰기재대서신장적표체.방법:이pET/gAd질립위모판,PCR확증목적편단,전화대장간균,용EcoR Ⅰ BamH Ⅰ쌍매절후,여pIRES2-EGFP형광질립련접,중조구건pIRES2-EGFP-gAd질립.장구건성공적pIRES2-EGFP-gAd질립채용지질체개도경복강주사정상대서체내,우주사24,48,96 h화7 d류취신장표본진행빙동절편,형광현미경하관찰록색형광단백재신조직중적표체,동시채용Western bot검측신조직록색형광단백적표체.결과여결론:중조구건적pIRES2-EGFP-gAd재체경쌍매절전영분석급DNA측서증실무감기돌변.재복강주사지질체/pIRES2-EGFP-gAd전염복합물24 h,즉가재신소구신간질검측도록색형광,주사48 h,형광진일보증강,지후축점감약,지주사7 d시,형광강도명현감약.Western bot검측적록색형광단백적표체결과여빙동조직절편결과일치.설명지질체능구개도pIRES2-EGFP-gAd진핵재체재대서신장표체.
