生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
2期
182-187
,共6页
β-甘露聚糖酶%黑曲霉%毕赤酵母%表达
β-甘露聚糖酶%黑麯黴%畢赤酵母%錶達
β-감로취당매%흑곡매%필적효모%표체
目的:克隆黑曲霉β-甘露聚糖酶基因,研究该基因在毕赤酵母中的表达情况.方法:运用RT-PCR从黑曲霉AN070902中克隆β-甘露聚糖酶cDNA片段,与载体pPIC9K相连,构建重组载体VMAN-pPIC9K,电转化毕赤酵母GS115,筛选产酶最高菌株进行5 L液体发酵,对该菌株所产重组酶进行酶学性质分析.结果:克隆获得1152 bp.cDNA,编码由383个氨基酸残基组成的蛋白质,该蛋白质属于GH5家族,理论pl和相对分子质量分别为4.48和41.6x103;筛选获得的重组菌株VMAN-pPIC9K-GS115在5 L液体发酵中上清酶活达11 785 U/mL;表达的重组酶是一种酸性β-甘露聚糖酶,最适反应pH值为3.0,经pH2.0-9.0处理2 h后剩余酶活保持90%以上;该重组酶最适反应温度为65℃,70℃处理1 h后剩余酶活保持75%以上;该重组酶活性被1 mmol/L的Fe3+和Mn2+显著抑制,被1mmol/L的Co2+显著激活.结论:重组耐酸性β-甘露聚糖酶的特性,决定了其在工业生产中,特别是动物饲料和食品加工中具有应用价值.
目的:剋隆黑麯黴β-甘露聚糖酶基因,研究該基因在畢赤酵母中的錶達情況.方法:運用RT-PCR從黑麯黴AN070902中剋隆β-甘露聚糖酶cDNA片段,與載體pPIC9K相連,構建重組載體VMAN-pPIC9K,電轉化畢赤酵母GS115,篩選產酶最高菌株進行5 L液體髮酵,對該菌株所產重組酶進行酶學性質分析.結果:剋隆穫得1152 bp.cDNA,編碼由383箇氨基痠殘基組成的蛋白質,該蛋白質屬于GH5傢族,理論pl和相對分子質量分彆為4.48和41.6x103;篩選穫得的重組菌株VMAN-pPIC9K-GS115在5 L液體髮酵中上清酶活達11 785 U/mL;錶達的重組酶是一種痠性β-甘露聚糖酶,最適反應pH值為3.0,經pH2.0-9.0處理2 h後剩餘酶活保持90%以上;該重組酶最適反應溫度為65℃,70℃處理1 h後剩餘酶活保持75%以上;該重組酶活性被1 mmol/L的Fe3+和Mn2+顯著抑製,被1mmol/L的Co2+顯著激活.結論:重組耐痠性β-甘露聚糖酶的特性,決定瞭其在工業生產中,特彆是動物飼料和食品加工中具有應用價值.
목적:극륭흑곡매β-감로취당매기인,연구해기인재필적효모중적표체정황.방법:운용RT-PCR종흑곡매AN070902중극륭β-감로취당매cDNA편단,여재체pPIC9K상련,구건중조재체VMAN-pPIC9K,전전화필적효모GS115,사선산매최고균주진행5 L액체발효,대해균주소산중조매진행매학성질분석.결과:극륭획득1152 bp.cDNA,편마유383개안기산잔기조성적단백질,해단백질속우GH5가족,이론pl화상대분자질량분별위4.48화41.6x103;사선획득적중조균주VMAN-pPIC9K-GS115재5 L액체발효중상청매활체11 785 U/mL;표체적중조매시일충산성β-감로취당매,최괄반응pH치위3.0,경pH2.0-9.0처리2 h후잉여매활보지90%이상;해중조매최괄반응온도위65℃,70℃처리1 h후잉여매활보지75%이상;해중조매활성피1 mmol/L적Fe3+화Mn2+현저억제,피1mmol/L적Co2+현저격활.결론:중조내산성β-감로취당매적특성,결정료기재공업생산중,특별시동물사료화식품가공중구유응용개치.
