生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
7期
186-190
,共5页
张念章%储岳峰%赵萍%高鹏程%贺英%逯忠新
張唸章%儲嶽峰%趙萍%高鵬程%賀英%逯忠新
장념장%저악봉%조평%고붕정%하영%록충신
副猪嗜血杆菌%重叠PCR%外源打靶基因
副豬嗜血桿菌%重疊PCR%外源打靶基因
부저기혈간균%중첩PCR%외원타파기인
利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown.通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各为5μL(450 ng)时得到Hup-kan-Hdown的量最多.将此外源打靶基因的两端引入Pst Ⅰ和SacⅠ酶切位点,克隆至具有迁移作用的自杀质粒pDS132,构建了可在大肠杆菌E.coli SM10-λpir中稳定遗传的打靶载体,为下一步建立副猪嗜血杆菌的高效基因打靶系统奠定基础.
利用重疊PCR法構建瞭包含副豬嗜血桿菌血清5型hhdA基因上、下遊同源臂(H-up、H-down)和卡那黴素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown.通過對反應條件進行優化,髮現退火溫度為50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各為5μL(450 ng)時得到Hup-kan-Hdown的量最多.將此外源打靶基因的兩耑引入Pst Ⅰ和SacⅠ酶切位點,剋隆至具有遷移作用的自殺質粒pDS132,構建瞭可在大腸桿菌E.coli SM10-λpir中穩定遺傳的打靶載體,為下一步建立副豬嗜血桿菌的高效基因打靶繫統奠定基礎.
이용중첩PCR법구건료포함부저기혈간균혈청5형hhdA기인상、하유동원비(H-up、H-down)화잡나매소항성기인(Kan)적외원타파기인Hup-kan-Hdown.통과대반응조건진행우화,발현퇴화온도위50.5℃,가입H-up、H-down화Kan각위5μL(450 ng)시득도Hup-kan-Hdown적량최다.장차외원타파기인적량단인입Pst Ⅰ화SacⅠ매절위점,극륭지구유천이작용적자살질립pDS132,구건료가재대장간균E.coli SM10-λpir중은정유전적타파재체,위하일보건립부저기혈간균적고효기인타파계통전정기출.
