西部医学
西部醫學
서부의학
MEDICAL JOURNAL OF WEST CHINA
2012年
6期
1067-1070
,共4页
许刚%郭燕舞%徐如祥%姜晓丹
許剛%郭燕舞%徐如祥%薑曉丹
허강%곽연무%서여상%강효단
白介素-18%腺病毒载体%骨髓间充质干细胞
白介素-18%腺病毒載體%骨髓間充質榦細胞
백개소-18%선병독재체%골수간충질간세포
目的 构建表达mIL-18基因的腺病毒载体,并转染大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs),观察其在rBMSCs中的表达,为脑胶质瘤的基因治疗实验研究奠定基础.方法 mIL-18基因亚克隆于穿梭质粒pAdtrackCMV上,构建的pAdtrackCMV-mIL-18线性化后转化已含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,挑选同源重组质粒,线性化后HEK293细胞包装,CsCI纯化.体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞免疫表型；然后转染rBMSCs,通过荧光显微镜、RT-PCR、ELISA等方法检测mIL-18表达.结果 成功构建了绿色荧光蛋白标记的腺病毒Ad-mIL-18,并在rBMSCs中高效表达.结论 pAdEasy-1是基因转染的高效系统,腺病毒Ad- mIL-18转染的rBMSCs可以作为脑肿瘤基因治疗研究的种子细胞.
目的 構建錶達mIL-18基因的腺病毒載體,併轉染大鼠骨髓間充質榦細胞(rBMSCs),觀察其在rBMSCs中的錶達,為腦膠質瘤的基因治療實驗研究奠定基礎.方法 mIL-18基因亞剋隆于穿梭質粒pAdtrackCMV上,構建的pAdtrackCMV-mIL-18線性化後轉化已含有腺病毒骨架質粒pAdEasy-1的大腸桿菌BJ5183感受態細胞,挑選同源重組質粒,線性化後HEK293細胞包裝,CsCI純化.體外分離培養大鼠骨髓間充質榦細胞,流式細胞儀檢測細胞免疫錶型；然後轉染rBMSCs,通過熒光顯微鏡、RT-PCR、ELISA等方法檢測mIL-18錶達.結果 成功構建瞭綠色熒光蛋白標記的腺病毒Ad-mIL-18,併在rBMSCs中高效錶達.結論 pAdEasy-1是基因轉染的高效繫統,腺病毒Ad- mIL-18轉染的rBMSCs可以作為腦腫瘤基因治療研究的種子細胞.
목적 구건표체mIL-18기인적선병독재체,병전염대서골수간충질간세포(rBMSCs),관찰기재rBMSCs중적표체,위뇌효질류적기인치료실험연구전정기출.방법 mIL-18기인아극륭우천사질립pAdtrackCMV상,구건적pAdtrackCMV-mIL-18선성화후전화이함유선병독골가질립pAdEasy-1적대장간균BJ5183감수태세포,도선동원중조질립,선성화후HEK293세포포장,CsCI순화.체외분리배양대서골수간충질간세포,류식세포의검측세포면역표형；연후전염rBMSCs,통과형광현미경、RT-PCR、ELISA등방법검측mIL-18표체.결과 성공구건료록색형광단백표기적선병독Ad-mIL-18,병재rBMSCs중고효표체.결론 pAdEasy-1시기인전염적고효계통,선병독Ad- mIL-18전염적rBMSCs가이작위뇌종류기인치료연구적충자세포.
