CAJ | 학술논문

目的:观察缺氧状态下人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中盘状结构域受体2(discoidin domain receptor 2,DDR2)的表达,观察Ⅰ型胶原缺氧刺激下RPE细胞中DDR2,缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,探讨Ⅰ型胶原和DDR2在脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)发生中的作用.方法:对照实验研究.将体外培养的人RPE细胞置于含终浓度为200μmol/L CoCl2的培养液中培养以建立RPE细胞化学缺氧模型.在缺氧后即刻(即常氧状态下)、2,6,12和24h终止缺氧,用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测RPE细胞中DDR2的表达.缺氧条件下以Ⅰ型胶原(10μg/mL,50℃孵箱内孵育)刺激,在刺激后即刻(即常氧状态下)、2,6,12,24h终止缺氧,用RT-PCR和Western blotting检测RPE细胞中DDR2和HIF-1α的表达,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法观察RPE细胞培养上清中VEGF的表达.结果:随着缺氧时间延长,RPE细胞中DDR2 mRNA和蛋白表达降低.在缺氧状态下Ⅰ型胶原仍可以随时间迁移使得DDR2 mRNA和蛋白表达增加,激活DDR2.缺氧胶原刺激组相对于缺氧组HIF-1α mRNA和蛋白表达减少,VEGF蛋白表达减少.结论:缺氧条件下,RPE细胞中DDR2表达随时间推移逐渐降低.Ⅰ型胶原仍可以随时间迁移激活DDR2,缺氧胶原刺激可以抑制缺氧诱导的RPE细胞HIF-1α和VEGF表达上调.
목적:관찰결양상태하인시망막색소상피(retinal pigment epithelium,RPE)세포중반상결구역수체2(discoidin domain receptor 2,DDR2)적표체,관찰Ⅰ형효원결양자격하RPE세포중DDR2,결양유도인자-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)화혈관내피생장인자(vascular endothelial growth factor,VEGF)적표체,탐토Ⅰ형효원화DDR2재맥락막신생혈관(choroidal neovascularization,CNV)발생중적작용.방법:대조실험연구.장체외배양적인RPE세포치우함종농도위200μmol/L CoCl2적배양액중배양이건립RPE세포화학결양모형.재결양후즉각(즉상양상태하)、2,6,12화24h종지결양,용면역형광、역전록취합매련반응(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)화면역단백인적법(Western blotting)검측RPE세포중DDR2적표체.결양조건하이Ⅰ형효원(10μg/mL,50℃부상내부육)자격,재자격후즉각(즉상양상태하)、2,6,12,24h종지결양,용RT-PCR화Western blotting검측RPE세포중DDR2화HIF-1α적표체,매련면역흡부시험(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)법관찰RPE세포배양상청중VEGF적표체.결과:수착결양시간연장,RPE세포중DDR2 mRNA화단백표체강저.재결양상태하Ⅰ형효원잉가이수시간천이사득DDR2 mRNA화단백표체증가,격활DDR2.결양효원자격조상대우결양조HIF-1α mRNA화단백표체감소,VEGF단백표체감소.결론:결양조건하,RPE세포중DDR2표체수시간추이축점강저.Ⅰ형효원잉가이수시간천이격활DDR2,결양효원자격가이억제결양유도적RPE세포HIF-1α화VEGF표체상조.