蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2004年
1期
90-94
,共5页
许小霞%徐兴耀%金丰良%张古忍%张文庆
許小霞%徐興耀%金豐良%張古忍%張文慶
허소하%서흥요%금봉량%장고인%장문경
家蝇%天蚕素%反转录聚合酶链式反应%开放阅读框%pPICZαA
傢蠅%天蠶素%反轉錄聚閤酶鏈式反應%開放閱讀框%pPICZαA
가승%천잠소%반전록취합매련식반응%개방열독광%pPICZαA
运用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从家蝇体内扩增出抗菌肽天蚕素(cecropin)基因的开放阅读框(ORF),与pMD-18T载体重组,经限制性酶切片段分析和核苷酸序列分析,与GenBank中报道的序列一致.根据此ORF,重新合成1对引物,并在碳末端进行定点突变,加上Asn编码,使其末端酰氨化,再利用半嵌套式PCR扩增出家蝇cecropin基因的成熟肽,与双酶切的酵母表达载体pPICZαA连接,经PCR和双酶切鉴定,成功构建了分泌型表达质粒.
運用反轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)技術從傢蠅體內擴增齣抗菌肽天蠶素(cecropin)基因的開放閱讀框(ORF),與pMD-18T載體重組,經限製性酶切片段分析和覈苷痠序列分析,與GenBank中報道的序列一緻.根據此ORF,重新閤成1對引物,併在碳末耑進行定點突變,加上Asn編碼,使其末耑酰氨化,再利用半嵌套式PCR擴增齣傢蠅cecropin基因的成熟肽,與雙酶切的酵母錶達載體pPICZαA連接,經PCR和雙酶切鑒定,成功構建瞭分泌型錶達質粒.
운용반전록취합매련식반응(RT-PCR)기술종가승체내확증출항균태천잠소(cecropin)기인적개방열독광(ORF),여pMD-18T재체중조,경한제성매절편단분석화핵감산서렬분석,여GenBank중보도적서렬일치.근거차ORF,중신합성1대인물,병재탄말단진행정점돌변,가상Asn편마,사기말단선안화,재이용반감투식PCR확증출가승cecropin기인적성숙태,여쌍매절적효모표체재체pPICZαA련접,경PCR화쌍매절감정,성공구건료분비형표체질립.
