农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2009年
3期
426-432
,共7页
刘甲%何玉龙%吕品%孙健红%张涌
劉甲%何玉龍%呂品%孫健紅%張湧
류갑%하옥룡%려품%손건홍%장용
信号转导及转录活化因子(star3)基因%牛乳腺上皮细胞%转染%生物学特性
信號轉導及轉錄活化因子(star3)基因%牛乳腺上皮細胞%轉染%生物學特性
신호전도급전록활화인자(star3)기인%우유선상피세포%전염%생물학특성
应用PCR技术从含有人信号转导及转录活化因子(star3)基因cDNA的质粒pOTa7中扩增star3基因片段.将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1中.构建重组表达质粒.利用脂质体介导法将重组表达质粒转染原代牛乳腺上皮细胞(bovinemammary epithelial cells).G418筛选阳性克隆.RT-PCR检测star3基因在牛乳腺上皮细胞中的表达,并通过流式细胞术(flowcytometry)检测转染细胞的增殖能力、周期以及DNA含量.结果表明.转染24 h后大约16%的细胞被导入含star3基因的重组表达质粒.在mRNA水平证实细胞内有stat3基因的高表达.导人star3基因后,细胞增殖能力增强,染色体变为三倍体,细胞的增殖寿命较对照细胞延长了13代.表明导入star3基因能延长体外培养的牛乳腺上皮细胞的寿命.
應用PCR技術從含有人信號轉導及轉錄活化因子(star3)基因cDNA的質粒pOTa7中擴增star3基因片段.將其剋隆入真覈錶達載體pEGFP-C1中.構建重組錶達質粒.利用脂質體介導法將重組錶達質粒轉染原代牛乳腺上皮細胞(bovinemammary epithelial cells).G418篩選暘性剋隆.RT-PCR檢測star3基因在牛乳腺上皮細胞中的錶達,併通過流式細胞術(flowcytometry)檢測轉染細胞的增殖能力、週期以及DNA含量.結果錶明.轉染24 h後大約16%的細胞被導入含star3基因的重組錶達質粒.在mRNA水平證實細胞內有stat3基因的高錶達.導人star3基因後,細胞增殖能力增彊,染色體變為三倍體,細胞的增殖壽命較對照細胞延長瞭13代.錶明導入star3基因能延長體外培養的牛乳腺上皮細胞的壽命.
응용PCR기술종함유인신호전도급전록활화인자(star3)기인cDNA적질립pOTa7중확증star3기인편단.장기극륭입진핵표체재체pEGFP-C1중.구건중조표체질립.이용지질체개도법장중조표체질립전염원대우유선상피세포(bovinemammary epithelial cells).G418사선양성극륭.RT-PCR검측star3기인재우유선상피세포중적표체,병통과류식세포술(flowcytometry)검측전염세포적증식능력、주기이급DNA함량.결과표명.전염24 h후대약16%적세포피도입함star3기인적중조표체질립.재mRNA수평증실세포내유stat3기인적고표체.도인star3기인후,세포증식능력증강,염색체변위삼배체,세포적증식수명교대조세포연장료13대.표명도입star3기인능연장체외배양적우유선상피세포적수명.
