癌症
癌癥
암증
CHINESE JOURNAL OF CANCER
2009年
8期
861-867
,共7页
齐彦宇%刘凯%张洁%李凯%任婧婧%林苹
齊彥宇%劉凱%張潔%李凱%任婧婧%林蘋
제언우%류개%장길%리개%임청청%림평
Na+-K+ATP酶B1亚基%阿霉素%乳腺肿瘤%MCF07细胞%生长抑制%逆转耐药
Na+-K+ATP酶B1亞基%阿黴素%乳腺腫瘤%MCF07細胞%生長抑製%逆轉耐藥
Na+-K+ATP매B1아기%아매소%유선종류%MCF07세포%생장억제%역전내약
背景与目的:Na+-K+ATP酶(Na+-K+泵)是细胞能量转换的重要系统,可能与肿瘤转移有关,其B1亚基基因ATP1B1在高分化的肿瘤细胞中表达高,低分化细胞中表达低.本实验研究ATP1B1协同阿霉素(ADM)在人乳腺癌细胞株MCF-7和其耐药株MCF-7/ADM中的作用以及其逆转耐药效应的影响.方法:将重组质粒PEGFP-ATP1B1转染到MCF-7和MCF-7/ADM细胞,MTT法检测质粒及其B1亚基凶沉默后ADM抑瘤效应,荧光显微镜和流式细胞术分析细胞内药物荧光强度,定磷法检测ATP酶活性,RT-PCR和real-time PCR检测MDR1 mRNA的表达,Western blot法检测P-gp印蛋白的表达.结果：转染PEGFP-ATPIBl的MCF-7和MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性相对阴性对照ADM-C3组(pEGFP-C3空载体转染)和空白对照ADM-RPMI-1640组均明显增加,且ADM各浓度梯度ADM-ATP1B1组与ADM-RPMI-1640组比较差异有统计学意义(P<0.05);而B1亚基沉默后阴性对照组ADM-shNC,相对实验组ADM-shATPlBl和空白对照ADM-RPMI-
1640组细胞对ADM的敏感性明显偏高.荧光显微镜下观察ADM-ATP1B1组MCF-7和MCF-7/ADM细胞ADM红色荧光均高于对照组.流式细胞术显示,ADM-ATP1B1组MCF-7细胞中ADM平均荧光强度较对照组高(P<0.05),ADM-ATP1B1组MCF-7/ADM细胞中ADM平均荧光强度高于对照组(P<0.05).MCF-7和MCF-7/ADM细胞的ADM-ATP1B1组ATP酶活性均高于ADM-RPMI-1640组(P<0.05).而ADM-C3组与ADM-RPMI-1640组相比差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR和real-time PCR检测结果显示.MCF-7/ADM细胞ADM-ATP1B1组MDR1 mRNA相对表达水平与两对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05).Western blot显示P-gp蛋白的表达水平差异无统计学意义(P>0.05).结论：ATPIBI对ADM抑制乳腺癌细胞生长具有协同作用,并可逆转耐药细胞MCF-7/ADM对ADM的耐药效应.其机理与MDRI基因无明显的相关性,可能是通过与Na+-K+ATP酶相关的一种新途径而发挥作用的.
揹景與目的:Na+-K+ATP酶(Na+-K+泵)是細胞能量轉換的重要繫統,可能與腫瘤轉移有關,其B1亞基基因ATP1B1在高分化的腫瘤細胞中錶達高,低分化細胞中錶達低.本實驗研究ATP1B1協同阿黴素(ADM)在人乳腺癌細胞株MCF-7和其耐藥株MCF-7/ADM中的作用以及其逆轉耐藥效應的影響.方法:將重組質粒PEGFP-ATP1B1轉染到MCF-7和MCF-7/ADM細胞,MTT法檢測質粒及其B1亞基兇沉默後ADM抑瘤效應,熒光顯微鏡和流式細胞術分析細胞內藥物熒光彊度,定燐法檢測ATP酶活性,RT-PCR和real-time PCR檢測MDR1 mRNA的錶達,Western blot法檢測P-gp印蛋白的錶達.結果：轉染PEGFP-ATPIBl的MCF-7和MCF-7/ADM細胞對ADM的敏感性相對陰性對照ADM-C3組(pEGFP-C3空載體轉染)和空白對照ADM-RPMI-1640組均明顯增加,且ADM各濃度梯度ADM-ATP1B1組與ADM-RPMI-1640組比較差異有統計學意義(P<0.05);而B1亞基沉默後陰性對照組ADM-shNC,相對實驗組ADM-shATPlBl和空白對照ADM-RPMI-
1640組細胞對ADM的敏感性明顯偏高.熒光顯微鏡下觀察ADM-ATP1B1組MCF-7和MCF-7/ADM細胞ADM紅色熒光均高于對照組.流式細胞術顯示,ADM-ATP1B1組MCF-7細胞中ADM平均熒光彊度較對照組高(P<0.05),ADM-ATP1B1組MCF-7/ADM細胞中ADM平均熒光彊度高于對照組(P<0.05).MCF-7和MCF-7/ADM細胞的ADM-ATP1B1組ATP酶活性均高于ADM-RPMI-1640組(P<0.05).而ADM-C3組與ADM-RPMI-1640組相比差異無統計學意義(P>0.05).RT-PCR和real-time PCR檢測結果顯示.MCF-7/ADM細胞ADM-ATP1B1組MDR1 mRNA相對錶達水平與兩對照組相比差異均無統計學意義(P>0.05).Western blot顯示P-gp蛋白的錶達水平差異無統計學意義(P>0.05).結論：ATPIBI對ADM抑製乳腺癌細胞生長具有協同作用,併可逆轉耐藥細胞MCF-7/ADM對ADM的耐藥效應.其機理與MDRI基因無明顯的相關性,可能是通過與Na+-K+ATP酶相關的一種新途徑而髮揮作用的.
배경여목적:Na+-K+ATP매(Na+-K+빙)시세포능량전환적중요계통,가능여종류전이유관,기B1아기기인ATP1B1재고분화적종류세포중표체고,저분화세포중표체저.본실험연구ATP1B1협동아매소(ADM)재인유선암세포주MCF-7화기내약주MCF-7/ADM중적작용이급기역전내약효응적영향.방법:장중조질립PEGFP-ATP1B1전염도MCF-7화MCF-7/ADM세포,MTT법검측질립급기B1아기흉침묵후ADM억류효응,형광현미경화류식세포술분석세포내약물형광강도,정린법검측ATP매활성,RT-PCR화real-time PCR검측MDR1 mRNA적표체,Western blot법검측P-gp인단백적표체.결과：전염PEGFP-ATPIBl적MCF-7화MCF-7/ADM세포대ADM적민감성상대음성대조ADM-C3조(pEGFP-C3공재체전염)화공백대조ADM-RPMI-1640조균명현증가,차ADM각농도제도ADM-ATP1B1조여ADM-RPMI-1640조비교차이유통계학의의(P<0.05);이B1아기침묵후음성대조조ADM-shNC,상대실험조ADM-shATPlBl화공백대조ADM-RPMI-
1640조세포대ADM적민감성명현편고.형광현미경하관찰ADM-ATP1B1조MCF-7화MCF-7/ADM세포ADM홍색형광균고우대조조.류식세포술현시,ADM-ATP1B1조MCF-7세포중ADM평균형광강도교대조조고(P<0.05),ADM-ATP1B1조MCF-7/ADM세포중ADM평균형광강도고우대조조(P<0.05).MCF-7화MCF-7/ADM세포적ADM-ATP1B1조ATP매활성균고우ADM-RPMI-1640조(P<0.05).이ADM-C3조여ADM-RPMI-1640조상비차이무통계학의의(P>0.05).RT-PCR화real-time PCR검측결과현시.MCF-7/ADM세포ADM-ATP1B1조MDR1 mRNA상대표체수평여량대조조상비차이균무통계학의의(P>0.05).Western blot현시P-gp단백적표체수평차이무통계학의의(P>0.05).결론：ATPIBI대ADM억제유선암세포생장구유협동작용,병가역전내약세포MCF-7/ADM대ADM적내약효응.기궤리여MDRI기인무명현적상관성,가능시통과여Na+-K+ATP매상관적일충신도경이발휘작용적.
