生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2009年
8期
94-98,108
,共6页
邱炎%王艳春%展德文%陶好霞%姜娜%韩秀萍%李家奎%刘纯杰
邱炎%王豔春%展德文%陶好霞%薑娜%韓秀萍%李傢奎%劉純傑
구염%왕염춘%전덕문%도호하%강나%한수평%리가규%류순걸
炭疽杆菌%保护性抗原%受体结合区%原核表达%多克隆抗体
炭疽桿菌%保護性抗原%受體結閤區%原覈錶達%多剋隆抗體
탄저간균%보호성항원%수체결합구%원핵표체%다극륭항체
原核表达炭疽杆菌保护性抗原受体结合区并制备该蛋白的多克隆抗体.从炭疽芽胞杆菌A16R中经PCR扩增得到了炭疽菌保护性抗原(PA)受体结合区基因,即PA的第四结构域(PA-D4),将其克隆至含有6×His编码序列的原核表达载体pET-2b(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行蛋白表达;用HiTrapTM Chelating HP柱纯化重组蛋白,Western blot进一步鉴定;以纯化后的蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔制备该蛋白的多克隆抗体;用ELISA和Western blot检测抗血清.结果表明,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度可达90%以上;制备了针对PA-D4融合蛋白的高效价抗血清,ELISA抗体滴度为1∶ 102 400;其抗体能特异性识别内源性的PA.PA-D4重组蛋白及其多克隆抗体的获得,为后续研究其功能和炭疽疫苗免疫保护机制奠定了基础.
原覈錶達炭疽桿菌保護性抗原受體結閤區併製備該蛋白的多剋隆抗體.從炭疽芽胞桿菌A16R中經PCR擴增得到瞭炭疽菌保護性抗原(PA)受體結閤區基因,即PA的第四結構域(PA-D4),將其剋隆至含有6×His編碼序列的原覈錶達載體pET-2b(+)中,將重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),在IPTG誘導下進行蛋白錶達;用HiTrapTM Chelating HP柱純化重組蛋白,Western blot進一步鑒定;以純化後的蛋白為抗原,免疫新西蘭大耳白兔製備該蛋白的多剋隆抗體;用ELISA和Western blot檢測抗血清.結果錶明,目的蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中穫得瞭可溶性錶達,純化後純度可達90%以上;製備瞭針對PA-D4融閤蛋白的高效價抗血清,ELISA抗體滴度為1∶ 102 400;其抗體能特異性識彆內源性的PA.PA-D4重組蛋白及其多剋隆抗體的穫得,為後續研究其功能和炭疽疫苗免疫保護機製奠定瞭基礎.
원핵표체탄저간균보호성항원수체결합구병제비해단백적다극륭항체.종탄저아포간균A16R중경PCR확증득도료탄저균보호성항원(PA)수체결합구기인,즉PA적제사결구역(PA-D4),장기극륭지함유6×His편마서렬적원핵표체재체pET-2b(+)중,장중조질립전화대장간균BL21(DE3),재IPTG유도하진행단백표체;용HiTrapTM Chelating HP주순화중조단백,Western blot진일보감정;이순화후적단백위항원,면역신서란대이백토제비해단백적다극륭항체;용ELISA화Western blot검측항혈청.결과표명,목적단백재대장간균BL21(DE3)중획득료가용성표체,순화후순도가체90%이상;제비료침대PA-D4융합단백적고효개항혈청,ELISA항체적도위1∶ 102 400;기항체능특이성식별내원성적PA.PA-D4중조단백급기다극륭항체적획득,위후속연구기공능화탄저역묘면역보호궤제전정료기출.
