小鼠Bpi条件基因打靶载体的构建和鉴定
소서Bpi조건기인타파재체적구건화감정
Construction and Identification of Mouse Bpi Conditional Gene Knockout Vector
  • 万方数据
    实验动物科学 실험동물과학
    LABORATORY ANIMAL SCIENCE
    2010年 4期 15-20 ,共6页

    康赟%林福玉%滕艳%侯宁%程萱%吕喆%孔庆利%安云庆

    강빈%림복옥%등염%후저%정훤%려철%공경리%안운경

    杀菌/渗透性增强蛋白(Bpi)%条件基因打靶载体%同源重组%Cre/LoxP系统 殺菌/滲透性增彊蛋白(Bpi)%條件基因打靶載體%同源重組%Cre/LoxP繫統
    살균/삼투성증강단백(Bpi)%조건기인타파재체%동원중조%Cre/LoxP계통
    目的 构建小鼠Bpi条件基因打靶载体,为建立Bpi条件基因打靶小鼠模型和深入研究Bpi基因功能奠定基础.方法 采用Cre/LoxP系统,选择小鼠Bpi基因第2、3外显子作为条件性敲除的目的 片段,并在其两侧插入LoxP位点;运用LA-PCR技术,以129品系小鼠ES细胞基因组DNA为模板分步扩增包括Bpi第2、3外显子(中间同源臂)和上游同源臂在内的3,1 kb基因片段以及下游同源臂4.9 kb基因片段;构建pBSK Ⅱ-5SLoxP和ploxPFRTNeo-3L重组质粒,将前者酶切产物(3.1 kb)与酶切后的ploxPFRTNeo-3L质粒相连获得Bpi条件基因打靶载体.结果 经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的pBSK Ⅱ-5SLoxP、ploxPFRTNeo-3L重组质粒和Bpi条件基因打靶载体结构正确,与设计相符.结论 成功构建了小鼠Bpi条件基因打靶载体.
    목적 구건소서Bpi조건기인타파재체,위건립Bpi조건기인타파소서모형화심입연구Bpi기인공능전정기출.방법 채용Cre/LoxP계통,선택소서Bpi기인제2、3외현자작위조건성고제적목적 편단,병재기량측삽입LoxP위점;운용LA-PCR기술,이129품계소서ES세포기인조DNA위모판분보확증포괄Bpi제2、3외현자(중간동원비)화상유동원비재내적3,1 kb기인편단이급하유동원비4.9 kb기인편단;구건pBSK Ⅱ-5SLoxP화ploxPFRTNeo-3L중조질립,장전자매절산물(3.1 kb)여매절후적ploxPFRTNeo-3L질립상련획득Bpi조건기인타파재체.결과 경다개한제성내절매매절감정화측서증실,구건적pBSK Ⅱ-5SLoxP、ploxPFRTNeo-3L중조질립화Bpi조건기인타파재체결구정학,여설계상부.결론 성공구건료소서Bpi조건기인타파재체.
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