时珍国医国药
時珍國醫國藥
시진국의국약
LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH
2011年
11期
2580-2582
,共3页
连翘%酪氨酸酶抑制%反应体系
連翹%酪氨痠酶抑製%反應體繫
련교%락안산매억제%반응체계
目的 研究连翘抑制酪氨酸酶活性实验在微孔板检测系统中适宜的反应体系.方法 以连翘两个极性部位的萃取物为受试对象,将反应总体积定为200μl,保持底物L-酪氨酸的体积40μl不变,依次变化酪氨酸酶和溶剂二甲亚砜的体积,在37℃环境下每2 min检测一次吸光度A475,持续40 min,以不含药时吸光度的变化值或含药时的酪氨酸酶活性抑制率作为参考指标,从酶体积、二甲亚砜体积及孵育时间等变化因素分析此实验适宜的反应体系.结果 ①吸光度值随着酶体积的增加而增高.酶体积为70μl时,吸光度值最高.不同酶体积的反应体系分别在20～26 min之间出现最大吸光度变化速率.②吸光度值随着二甲亚砜体积增加而增高.二甲亚砜终体积分数为5％时,样品溶解程度和线性关系均较2％时好.结论 此实验适宜的反应体系为:底物L-酪氨酸40μl,酶体积70μl或以下,加入适量pH6.8缓冲液和受试药物,使二甲亚砜的终体积分数为5％,体系总体积为200μl,恒温37℃下孵育20～26 min之后检测.此反应体系为下一步研究连翘抑制酪氨酸酶活性实验提供基础,也为其他药物的同类实验提供方法学参考.
目的 研究連翹抑製酪氨痠酶活性實驗在微孔闆檢測繫統中適宜的反應體繫.方法 以連翹兩箇極性部位的萃取物為受試對象,將反應總體積定為200μl,保持底物L-酪氨痠的體積40μl不變,依次變化酪氨痠酶和溶劑二甲亞砜的體積,在37℃環境下每2 min檢測一次吸光度A475,持續40 min,以不含藥時吸光度的變化值或含藥時的酪氨痠酶活性抑製率作為參攷指標,從酶體積、二甲亞砜體積及孵育時間等變化因素分析此實驗適宜的反應體繫.結果 ①吸光度值隨著酶體積的增加而增高.酶體積為70μl時,吸光度值最高.不同酶體積的反應體繫分彆在20～26 min之間齣現最大吸光度變化速率.②吸光度值隨著二甲亞砜體積增加而增高.二甲亞砜終體積分數為5％時,樣品溶解程度和線性關繫均較2％時好.結論 此實驗適宜的反應體繫為:底物L-酪氨痠40μl,酶體積70μl或以下,加入適量pH6.8緩遲液和受試藥物,使二甲亞砜的終體積分數為5％,體繫總體積為200μl,恆溫37℃下孵育20～26 min之後檢測.此反應體繫為下一步研究連翹抑製酪氨痠酶活性實驗提供基礎,也為其他藥物的同類實驗提供方法學參攷.
목적 연구련교억제락안산매활성실험재미공판검측계통중괄의적반응체계.방법 이련교량개겁성부위적췌취물위수시대상,장반응총체적정위200μl,보지저물L-락안산적체적40μl불변,의차변화락안산매화용제이갑아풍적체적,재37℃배경하매2 min검측일차흡광도A475,지속40 min,이불함약시흡광도적변화치혹함약시적락안산매활성억제솔작위삼고지표,종매체적、이갑아풍체적급부육시간등변화인소분석차실험괄의적반응체계.결과 ①흡광도치수착매체적적증가이증고.매체적위70μl시,흡광도치최고.불동매체적적반응체계분별재20～26 min지간출현최대흡광도변화속솔.②흡광도치수착이갑아풍체적증가이증고.이갑아풍종체적분수위5％시,양품용해정도화선성관계균교2％시호.결론 차실험괄의적반응체계위:저물L-락안산40μl,매체적70μl혹이하,가입괄량pH6.8완충액화수시약물,사이갑아풍적종체적분수위5％,체계총체적위200μl,항온37℃하부육20～26 min지후검측.차반응체계위하일보연구련교억제락안산매활성실험제공기출,야위기타약물적동류실험제공방법학삼고.
