南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
3期
312-316
,共5页
王妮娜%谢剑明%郑大勇%左强%廖旺军
王妮娜%謝劍明%鄭大勇%左彊%廖旺軍
왕니나%사검명%정대용%좌강%료왕군
MACC1%293FT细胞%载体构建%基因芯片
MACC1%293FT細胞%載體構建%基因芯片
MACC1%293FT세포%재체구건%기인심편
目的 构建含有全长肠癌转移相关基因(MACC1)的表达载体,建立稳定表达MACC1的胃癌BGC-823/pBaBb-puro-MACC1细胞系,通过基因芯片技术筛选出转染MACC1后胃癌细胞株的差异表达基因,探讨MACC1基因与差异基因之间可能的调节机制或信号通路.方法 以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获全长MACC1 cDNA序列,将目的基因序列克隆入带有绿色荧光蛋白报告基因的pBaBb-puro表达载体,建立pBaBb-puro-MACC1表达载体.经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况判断是否构建成功.构建成功后的pBaBb-puro-MACC1表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达MACC1的BGC-823/pBaBb-puro-MACC1细胞.qRT-PCR及western blot检测转染细胞的MACC1基因表达,应用基因芯片技术筛选出转染MACC1基因后胃癌细胞株的差异表达基因并对其探讨研究.结果 成功扩增全长MACC1cDNA,经测序鉴定序列完全正确；转染293FT细胞可见清晰的绿色荧光表达.BGC-823/pBaBb-puro-MACC1细胞能够稳定表达MACC1.基因芯片筛选出差异基因发现上调基因33个,下调基因24个,这些差异表达基因的功能涉及多个方面.结论成功构建了含有全长MACC1cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达MACC1的BGC-823/pBaBb-puro-MACC1细胞,通过对差异基因的分析发现MACC1可能引起胃癌细胞株BGC-823基因表达谱中一些非常重要的分子的改变,为MACC1基因进一步研究奠定了良好基础.
目的 構建含有全長腸癌轉移相關基因(MACC1)的錶達載體,建立穩定錶達MACC1的胃癌BGC-823/pBaBb-puro-MACC1細胞繫,通過基因芯片技術篩選齣轉染MACC1後胃癌細胞株的差異錶達基因,探討MACC1基因與差異基因之間可能的調節機製或信號通路.方法 以人胚腎293FT細胞為模闆,經PCR擴增穫全長MACC1 cDNA序列,將目的基因序列剋隆入帶有綠色熒光蛋白報告基因的pBaBb-puro錶達載體,建立pBaBb-puro-MACC1錶達載體.經限製性內切酶酶切鑒定、測序併轉染293FT細胞觀察報告基因錶達情況判斷是否構建成功.構建成功後的pBaBb-puro-MACC1錶達載體轉染人胃癌BGC-823細胞,建立穩定錶達MACC1的BGC-823/pBaBb-puro-MACC1細胞.qRT-PCR及western blot檢測轉染細胞的MACC1基因錶達,應用基因芯片技術篩選齣轉染MACC1基因後胃癌細胞株的差異錶達基因併對其探討研究.結果 成功擴增全長MACC1cDNA,經測序鑒定序列完全正確；轉染293FT細胞可見清晰的綠色熒光錶達.BGC-823/pBaBb-puro-MACC1細胞能夠穩定錶達MACC1.基因芯片篩選齣差異基因髮現上調基因33箇,下調基因24箇,這些差異錶達基因的功能涉及多箇方麵.結論成功構建瞭含有全長MACC1cDNA的錶達載體繫統,建立瞭穩定錶達MACC1的BGC-823/pBaBb-puro-MACC1細胞,通過對差異基因的分析髮現MACC1可能引起胃癌細胞株BGC-823基因錶達譜中一些非常重要的分子的改變,為MACC1基因進一步研究奠定瞭良好基礎.
목적 구건함유전장장암전이상관기인(MACC1)적표체재체,건립은정표체MACC1적위암BGC-823/pBaBb-puro-MACC1세포계,통과기인심편기술사선출전염MACC1후위암세포주적차이표체기인,탐토MACC1기인여차이기인지간가능적조절궤제혹신호통로.방법 이인배신293FT세포위모판,경PCR확증획전장MACC1 cDNA서렬,장목적기인서렬극륭입대유록색형광단백보고기인적pBaBb-puro표체재체,건립pBaBb-puro-MACC1표체재체.경한제성내절매매절감정、측서병전염293FT세포관찰보고기인표체정황판단시부구건성공.구건성공후적pBaBb-puro-MACC1표체재체전염인위암BGC-823세포,건립은정표체MACC1적BGC-823/pBaBb-puro-MACC1세포.qRT-PCR급western blot검측전염세포적MACC1기인표체,응용기인심편기술사선출전염MACC1기인후위암세포주적차이표체기인병대기탐토연구.결과 성공확증전장MACC1cDNA,경측서감정서렬완전정학；전염293FT세포가견청석적록색형광표체.BGC-823/pBaBb-puro-MACC1세포능구은정표체MACC1.기인심편사선출차이기인발현상조기인33개,하조기인24개,저사차이표체기인적공능섭급다개방면.결론성공구건료함유전장MACC1cDNA적표체재체계통,건립료은정표체MACC1적BGC-823/pBaBb-puro-MACC1세포,통과대차이기인적분석발현MACC1가능인기위암세포주BGC-823기인표체보중일사비상중요적분자적개변,위MACC1기인진일보연구전정료량호기출.
