中华检验医学杂志
中華檢驗醫學雜誌
중화검험의학잡지
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2006年
12期
1111-1115
,共5页
李晓军%汪萍%贾丽%马百坤%夏欣一%虞伟%武建国
李曉軍%汪萍%賈麗%馬百坤%夏訢一%虞偉%武建國
리효군%왕평%가려%마백곤%하흔일%우위%무건국
分化抑制因子%肺肿瘤%重组融合蛋白
分化抑製因子%肺腫瘤%重組融閤蛋白
분화억제인자%폐종류%중조융합단백
目的 构建人分化抑制因子3(Id3)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因表达载体pEGFP/Id3,使Id3-EGFP融合蛋白在人肺癌细胞A549中得到表达.方法 扩增并克隆人Id3 cDNA,构建Id3和EGFP的融合基因表达载体pEGFP/Id3.用脂质体转染技术将pEGFP/Id3导入A549细胞,使Id3-EGFP融合蛋白在A549细胞得到表达.结果 经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实,Id3基因已正确插入pEGFP-N1中EGFP基因的上游,获得融合基因表达载体pEGFP/Id3.利用脂质体转染技术将pEGFP和pEGFP/Id3转入A549细胞,24 h后,在激光共聚焦荧光显微镜下可观察到表达EGFP的细胞发出绿色荧光,流式细胞术分析表明,转染48 h时EGFP阳性表达细胞率最高,分别可达65.40%和60.50%.pEGFP/Id3转染的A549细胞S期细胞和G2期细胞比例均明显高于pEGFP转染细胞组和未转染细胞组,表明Id3基因的导入可诱导细胞从G1期向G2期发展,从而促进细胞增殖.结论 真核表达载体pEGFP/Id3的成功构建及其在A549细胞中的表达,为研究Id3的细胞定位表达及Id3在细胞生长调控中的作用奠定了实验基础.
目的 構建人分化抑製因子3(Id3)與增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)的融閤基因錶達載體pEGFP/Id3,使Id3-EGFP融閤蛋白在人肺癌細胞A549中得到錶達.方法 擴增併剋隆人Id3 cDNA,構建Id3和EGFP的融閤基因錶達載體pEGFP/Id3.用脂質體轉染技術將pEGFP/Id3導入A549細胞,使Id3-EGFP融閤蛋白在A549細胞得到錶達.結果 經轉化細菌、抽提質粒、酶切鑒定和DNA序列分析證實,Id3基因已正確插入pEGFP-N1中EGFP基因的上遊,穫得融閤基因錶達載體pEGFP/Id3.利用脂質體轉染技術將pEGFP和pEGFP/Id3轉入A549細胞,24 h後,在激光共聚焦熒光顯微鏡下可觀察到錶達EGFP的細胞髮齣綠色熒光,流式細胞術分析錶明,轉染48 h時EGFP暘性錶達細胞率最高,分彆可達65.40%和60.50%.pEGFP/Id3轉染的A549細胞S期細胞和G2期細胞比例均明顯高于pEGFP轉染細胞組和未轉染細胞組,錶明Id3基因的導入可誘導細胞從G1期嚮G2期髮展,從而促進細胞增殖.結論 真覈錶達載體pEGFP/Id3的成功構建及其在A549細胞中的錶達,為研究Id3的細胞定位錶達及Id3在細胞生長調控中的作用奠定瞭實驗基礎.
목적 구건인분화억제인자3(Id3)여증강형록색형광단백(EGFP)적융합기인표체재체pEGFP/Id3,사Id3-EGFP융합단백재인폐암세포A549중득도표체.방법 확증병극륭인Id3 cDNA,구건Id3화EGFP적융합기인표체재체pEGFP/Id3.용지질체전염기술장pEGFP/Id3도입A549세포,사Id3-EGFP융합단백재A549세포득도표체.결과 경전화세균、추제질립、매절감정화DNA서렬분석증실,Id3기인이정학삽입pEGFP-N1중EGFP기인적상유,획득융합기인표체재체pEGFP/Id3.이용지질체전염기술장pEGFP화pEGFP/Id3전입A549세포,24 h후,재격광공취초형광현미경하가관찰도표체EGFP적세포발출록색형광,류식세포술분석표명,전염48 h시EGFP양성표체세포솔최고,분별가체65.40%화60.50%.pEGFP/Id3전염적A549세포S기세포화G2기세포비례균명현고우pEGFP전염세포조화미전염세포조,표명Id3기인적도입가유도세포종G1기향G2기발전,종이촉진세포증식.결론 진핵표체재체pEGFP/Id3적성공구건급기재A549세포중적표체,위연구Id3적세포정위표체급Id3재세포생장조공중적작용전정료실험기출.
