生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2003年
3期
483-487
,共5页
张强哲%秦曦明%梁荣%邓明俊%何宏轩%张彦明%郑昌学%段明星
張彊哲%秦晞明%樑榮%鄧明俊%何宏軒%張彥明%鄭昌學%段明星
장강철%진희명%량영%산명준%하굉헌%장언명%정창학%단명성
禽流感病毒%HA基因%真核表达质粒%表达%生物活性
禽流感病毒%HA基因%真覈錶達質粒%錶達%生物活性
금류감병독%HA기인%진핵표체질립%표체%생물활성
血凝素蛋白(HA)基因是禽流感病毒(AIV)重要的保护性抗原基因.为了研究 HA基因疫苗,用PCR扩增H5亚型AIV HA基因,将其克隆到质粒pcDNA4/HisMax和pRc/CMV上得到真核表达质粒pC4H5和pCMVH5.采用TfxTM-20、Superfect转染试剂和电转染法转染HeLa细胞,转染后的HeLa细胞经蛋白质印迹和血凝试验检测HA蛋白及其活性.结果表明,Superfect转染和电转染均能正确表达HA蛋白并具有生物学活性,蛋白质印迹检测到HA和HA裂解的HA1和HA2,与AIV 的HA、HA1、HA2蛋白的分子质量一致.从血凝试验结果看,Superfect和电转染表达的HA均具有血凝活性,而经Superfect转染的pC4H5的表达量是pCMVH5的8倍,表明pC4H5是一高效的真核表达质粒.
血凝素蛋白(HA)基因是禽流感病毒(AIV)重要的保護性抗原基因.為瞭研究 HA基因疫苗,用PCR擴增H5亞型AIV HA基因,將其剋隆到質粒pcDNA4/HisMax和pRc/CMV上得到真覈錶達質粒pC4H5和pCMVH5.採用TfxTM-20、Superfect轉染試劑和電轉染法轉染HeLa細胞,轉染後的HeLa細胞經蛋白質印跡和血凝試驗檢測HA蛋白及其活性.結果錶明,Superfect轉染和電轉染均能正確錶達HA蛋白併具有生物學活性,蛋白質印跡檢測到HA和HA裂解的HA1和HA2,與AIV 的HA、HA1、HA2蛋白的分子質量一緻.從血凝試驗結果看,Superfect和電轉染錶達的HA均具有血凝活性,而經Superfect轉染的pC4H5的錶達量是pCMVH5的8倍,錶明pC4H5是一高效的真覈錶達質粒.
혈응소단백(HA)기인시금류감병독(AIV)중요적보호성항원기인.위료연구 HA기인역묘,용PCR확증H5아형AIV HA기인,장기극륭도질립pcDNA4/HisMax화pRc/CMV상득도진핵표체질립pC4H5화pCMVH5.채용TfxTM-20、Superfect전염시제화전전염법전염HeLa세포,전염후적HeLa세포경단백질인적화혈응시험검측HA단백급기활성.결과표명,Superfect전염화전전염균능정학표체HA단백병구유생물학활성,단백질인적검측도HA화HA렬해적HA1화HA2,여AIV 적HA、HA1、HA2단백적분자질량일치.종혈응시험결과간,Superfect화전전염표체적HA균구유혈응활성,이경Superfect전염적pC4H5적표체량시pCMVH5적8배,표명pC4H5시일고효적진핵표체질립.
