中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2004年
2期
55-60
,共6页
刘凯于%蒋才富%洪华珠%彭建新%余泽华
劉凱于%蔣纔富%洪華珠%彭建新%餘澤華
류개우%장재부%홍화주%팽건신%여택화
Cry1Ac%粉纹夜蛾细胞系%抗性敏感%mRNA差异显示
Cry1Ac%粉紋夜蛾細胞繫%抗性敏感%mRNA差異顯示
Cry1Ac%분문야아세포계%항성민감%mRNA차이현시
为了研究昆虫对Bt的抗性机制,以苏云金芽孢杆菌 Cry1Ac活性毒素对粉纹夜蛾离体细胞连续筛选80代,获得了高抗性细胞.采用DDRT-PCR技术比较了该抗性细胞与非选择敏感细胞mRNA的差异,经反向RNA斑点印迹杂交确证了5个片段为两种细胞的显著差异表达序列标签(ESTs).序列分析结果表明,敏感细胞特有的三种ESTs都位于cDNA的非编码区,两种ESTs(GenBank注册号:S1,CF322415; S3, CF322417)与数据库中EST没有显著同源性,另一种S2(GenBank注册号:CF322416)与已登录的某些昆虫的ESTs具有一定的同源性.从抗性细胞特有的R1(GenBank注册号:CF322413)推导出的氨基酸序列与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶有60%～63%的同源性,从抗性细胞特有的R2(GenBank注册号:CF322414)推导出的氨基酸序列与黏蛋白类有约30%的同源性.这些差异表达基因可能与抗性的形成相关.
為瞭研究昆蟲對Bt的抗性機製,以囌雲金芽孢桿菌 Cry1Ac活性毒素對粉紋夜蛾離體細胞連續篩選80代,穫得瞭高抗性細胞.採用DDRT-PCR技術比較瞭該抗性細胞與非選擇敏感細胞mRNA的差異,經反嚮RNA斑點印跡雜交確證瞭5箇片段為兩種細胞的顯著差異錶達序列標籤(ESTs).序列分析結果錶明,敏感細胞特有的三種ESTs都位于cDNA的非編碼區,兩種ESTs(GenBank註冊號:S1,CF322415; S3, CF322417)與數據庫中EST沒有顯著同源性,另一種S2(GenBank註冊號:CF322416)與已登錄的某些昆蟲的ESTs具有一定的同源性.從抗性細胞特有的R1(GenBank註冊號:CF322413)推導齣的氨基痠序列與燐痠烯醇式丙酮痠羧激酶有60%～63%的同源性,從抗性細胞特有的R2(GenBank註冊號:CF322414)推導齣的氨基痠序列與黏蛋白類有約30%的同源性.這些差異錶達基因可能與抗性的形成相關.
위료연구곤충대Bt적항성궤제,이소운금아포간균 Cry1Ac활성독소대분문야아리체세포련속사선80대,획득료고항성세포.채용DDRT-PCR기술비교료해항성세포여비선택민감세포mRNA적차이,경반향RNA반점인적잡교학증료5개편단위량충세포적현저차이표체서렬표첨(ESTs).서렬분석결과표명,민감세포특유적삼충ESTs도위우cDNA적비편마구,량충ESTs(GenBank주책호:S1,CF322415; S3, CF322417)여수거고중EST몰유현저동원성,령일충S2(GenBank주책호:CF322416)여이등록적모사곤충적ESTs구유일정적동원성.종항성세포특유적R1(GenBank주책호:CF322413)추도출적안기산서렬여린산희순식병동산최격매유60%～63%적동원성,종항성세포특유적R2(GenBank주책호:CF322414)추도출적안기산서렬여점단백류유약30%적동원성.저사차이표체기인가능여항성적형성상관.
