中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2006年
4期
311-314,319
,共5页
张群%胡雪梅%赵明东%高美华%傅凤华%苏长海%孙殿敬
張群%鬍雪梅%趙明東%高美華%傅鳳華%囌長海%孫殿敬
장군%호설매%조명동%고미화%부봉화%소장해%손전경
乙酰胆碱酯酶%噬菌体肽库%表位
乙酰膽堿酯酶%噬菌體肽庫%錶位
을선담감지매%서균체태고%표위
目的:筛选和鉴定乙酰胆碱酯酶的有效抗原表位.方法:收集乙酰胆碱受体抗体阴性而乙酰胆碱酯酶抗体阳性的重症肌无力病人血清,采用溴化氰活化的琼脂糖柱(CNBr-actived sepharoseTM4B)纯化抗乙酰胆碱酯酶的多克隆抗体并定量;用纯化的抗乙酰胆碱酯酶的抗体对随机的12肽噬菌体表面显示肽库进行5轮免疫学筛选,随机挑取克隆;采用Western blot免疫识别,识别为阳性的克隆进行核苷酸序列的测定,并与乙酰胆碱酯酶的氨基酸序列进行同源性比较.将获得的不同表位的阳性克隆分别免疫小鼠,采用Western blot筛选能刺激小鼠产生抗乙酰胆碱酯酶抗体的阳性克隆,进行生物学活性的鉴定.结果:经5轮免疫学筛选后挑取的49个克隆中,经Western blot识别15个克隆能被抗乙酰胆碱酯酶抗体识别.核苷酸序列分析发现共有7种不同的表位,其中1种表位与乙酰胆碱酯酶有较高的同源性,其余6种表位与其无一级结构的同源性.经动物免疫初步实验筛选,共有5个免疫原性较强的阳性克隆,其免疫的鼠血清均可识别人乙酰胆碱酯酶.结论:获得了5种乙酰胆碱酯酶的有效抗原表位,1种可能为结构表位,4种为模拟表位.
目的:篩選和鑒定乙酰膽堿酯酶的有效抗原錶位.方法:收集乙酰膽堿受體抗體陰性而乙酰膽堿酯酶抗體暘性的重癥肌無力病人血清,採用溴化氰活化的瓊脂糖柱(CNBr-actived sepharoseTM4B)純化抗乙酰膽堿酯酶的多剋隆抗體併定量;用純化的抗乙酰膽堿酯酶的抗體對隨機的12肽噬菌體錶麵顯示肽庫進行5輪免疫學篩選,隨機挑取剋隆;採用Western blot免疫識彆,識彆為暘性的剋隆進行覈苷痠序列的測定,併與乙酰膽堿酯酶的氨基痠序列進行同源性比較.將穫得的不同錶位的暘性剋隆分彆免疫小鼠,採用Western blot篩選能刺激小鼠產生抗乙酰膽堿酯酶抗體的暘性剋隆,進行生物學活性的鑒定.結果:經5輪免疫學篩選後挑取的49箇剋隆中,經Western blot識彆15箇剋隆能被抗乙酰膽堿酯酶抗體識彆.覈苷痠序列分析髮現共有7種不同的錶位,其中1種錶位與乙酰膽堿酯酶有較高的同源性,其餘6種錶位與其無一級結構的同源性.經動物免疫初步實驗篩選,共有5箇免疫原性較彊的暘性剋隆,其免疫的鼠血清均可識彆人乙酰膽堿酯酶.結論:穫得瞭5種乙酰膽堿酯酶的有效抗原錶位,1種可能為結構錶位,4種為模擬錶位.
목적:사선화감정을선담감지매적유효항원표위.방법:수집을선담감수체항체음성이을선담감지매항체양성적중증기무력병인혈청,채용추화청활화적경지당주(CNBr-actived sepharoseTM4B)순화항을선담감지매적다극륭항체병정량;용순화적항을선담감지매적항체대수궤적12태서균체표면현시태고진행5륜면역학사선,수궤도취극륭;채용Western blot면역식별,식별위양성적극륭진행핵감산서렬적측정,병여을선담감지매적안기산서렬진행동원성비교.장획득적불동표위적양성극륭분별면역소서,채용Western blot사선능자격소서산생항을선담감지매항체적양성극륭,진행생물학활성적감정.결과:경5륜면역학사선후도취적49개극륭중,경Western blot식별15개극륭능피항을선담감지매항체식별.핵감산서렬분석발현공유7충불동적표위,기중1충표위여을선담감지매유교고적동원성,기여6충표위여기무일급결구적동원성.경동물면역초보실험사선,공유5개면역원성교강적양성극륭,기면역적서혈청균가식별인을선담감지매.결론:획득료5충을선담감지매적유효항원표위,1충가능위결구표위,4충위모의표위.
