CAJ | 학술논문

为了研究血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)受体在成年大鼠心肌成纤维细胞的信号转导机制,分离及培养成年Sprague-Dawley大鼠心肌成纤维细胞,采用免疫组化染色测定Ang Ⅱ受体的蛋白表达.将细胞随机分为四组进行药物干预48 h:Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+losartan组、Ang Ⅱ+PDl23319组和Ang Ⅱ+losartan+PDl23319组.抽提mRNA制备cDNA探针,与G蛋白耦联受体信号通路发现者基因芯片杂交,筛选表达差异的基因.发现血管紧张素Ⅱ 1型(angiotensin Ⅱ type1,ATl)受体被losartan阻断后,Ang Ⅱ刺激的心肌成纤维细胞血管紧张素Ⅱ 2型(angiotensin Ⅱ type 2,AT2)受体蛋白高表达;34个基因表达差异在2倍以上,30个下调,4个上调,其最大改变不超过20倍;9条信号通路被活化:cAMP/PKA、Ca2+、PKC、PLC、MAPK、PI-3K、NO-cGMP、Rho、NF-кB通路.当AT2受体被PDl23319阻断时,64个基因表达差异在2倍以上,48个下调,16个上调;11条途径基础活化,其中7个基因的改变在30倍以上:Cypl9al(37倍)、Illr2(42倍)、Cflar(53倍)、Bcl21(31倍)、Pik3cg(278倍)、Cdknla(90倍)、Agt(162倍).在AT1受体阻断的基础上再阻断AT2受体,46个基因表达差异在2倍以上,36个下调,10个上调;11条信号途径全部活化.其结果与单独阻断AT2受体信号途径基本一致.RT-PCR选取IL-1β和TNF-α进行验证,结果与芯片各组间的变化趋势基本相符.结果表明,在成年大鼠心肌成纤维细胞,AT2受体阻断明显不同于AT1受体阻断,在信号转导通路相关基因表达谱上,两者有显著差异.
위료연구혈관긴장소Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)수체재성년대서심기성섬유세포적신호전도궤제,분리급배양성년Sprague-Dawley대서심기성섬유세포,채용면역조화염색측정Ang Ⅱ수체적단백표체.장세포수궤분위사조진행약물간예48 h:Ang Ⅱ조、Ang Ⅱ+losartan조、Ang Ⅱ+PDl23319조화Ang Ⅱ+losartan+PDl23319조.추제mRNA제비cDNA탐침,여G단백우련수체신호통로발현자기인심편잡교,사선표체차이적기인.발현혈관긴장소Ⅱ 1형(angiotensin Ⅱ type1,ATl)수체피losartan조단후,Ang Ⅱ자격적심기성섬유세포혈관긴장소Ⅱ 2형(angiotensin Ⅱ type 2,AT2)수체단백고표체;34개기인표체차이재2배이상,30개하조,4개상조,기최대개변불초과20배;9조신호통로피활화:cAMP/PKA、Ca2+、PKC、PLC、MAPK、PI-3K、NO-cGMP、Rho、NF-кB통로.당AT2수체피PDl23319조단시,64개기인표체차이재2배이상,48개하조,16개상조;11조도경기출활화,기중7개기인적개변재30배이상:Cypl9al(37배)、Illr2(42배)、Cflar(53배)、Bcl21(31배)、Pik3cg(278배)、Cdknla(90배)、Agt(162배).재AT1수체조단적기출상재조단AT2수체,46개기인표체차이재2배이상,36개하조,10개상조;11조신호도경전부활화.기결과여단독조단AT2수체신호도경기본일치.RT-PCR선취IL-1β화TNF-α진행험증,결과여심편각조간적변화추세기본상부.결과표명,재성년대서심기성섬유세포,AT2수체조단명현불동우AT1수체조단,재신호전도통로상관기인표체보상,량자유현저차이.