基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2006年
12期
1313-1318
,共6页
关云谦%蔡彦宁%谢淑%朱宛宛%徐艳玲%张愚%陈彪
關雲謙%蔡彥寧%謝淑%硃宛宛%徐豔玲%張愚%陳彪
관운겸%채언저%사숙%주완완%서염령%장우%진표
胚胎小体%巢式聚合酶链反应%时钟基因%单细胞
胚胎小體%巢式聚閤酶鏈反應%時鐘基因%單細胞
배태소체%소식취합매련반응%시종기인%단세포
目的 建立一组灵敏的检测时钟基因(clock gene)的巢式聚合酶链反应(nested PCR)方法,并检测小鼠胚胎小体(EB)来源的单细胞中重要时钟基因的表达情况.方法 培养小鼠胚胎干细胞(mESC),体外诱导分化为EB,提取总RNA并进行反转录,用BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因特异引物进行巢式聚合酶链反应,电泳检测扩增产物,从而建立相应的巢式PCR反应体系.利用膜片钳获取胚胎小体来源的单个细胞,通过巢式PCR反应检测相应时钟基因的表达情况.结果 确定了BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因的扩增参数.证明在此条件下无非特异扩增,并且能够检测到至少两个拷贝的目的分子.利用此检测体系发现,部分胚胎小体细胞中BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2时钟基因环路不完整.结论 巢式PCR方法能够灵敏地、而且特异地从单细胞中检测出一组时钟基因的表达,时钟基因的转录在胚胎小体细胞中并不一致,即时钟基因的环路不完整.时钟基因可能在细胞分化过程中发挥着某种作用.
目的 建立一組靈敏的檢測時鐘基因(clock gene)的巢式聚閤酶鏈反應(nested PCR)方法,併檢測小鼠胚胎小體(EB)來源的單細胞中重要時鐘基因的錶達情況.方法 培養小鼠胚胎榦細胞(mESC),體外誘導分化為EB,提取總RNA併進行反轉錄,用BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因特異引物進行巢式聚閤酶鏈反應,電泳檢測擴增產物,從而建立相應的巢式PCR反應體繫.利用膜片鉗穫取胚胎小體來源的單箇細胞,通過巢式PCR反應檢測相應時鐘基因的錶達情況.結果 確定瞭BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因的擴增參數.證明在此條件下無非特異擴增,併且能夠檢測到至少兩箇拷貝的目的分子.利用此檢測體繫髮現,部分胚胎小體細胞中BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2時鐘基因環路不完整.結論 巢式PCR方法能夠靈敏地、而且特異地從單細胞中檢測齣一組時鐘基因的錶達,時鐘基因的轉錄在胚胎小體細胞中併不一緻,即時鐘基因的環路不完整.時鐘基因可能在細胞分化過程中髮揮著某種作用.
목적 건립일조령민적검측시종기인(clock gene)적소식취합매련반응(nested PCR)방법,병검측소서배태소체(EB)래원적단세포중중요시종기인적표체정황.방법 배양소서배태간세포(mESC),체외유도분화위EB,제취총RNA병진행반전록,용BMAL1、CLOCK、CRY1화CRY2기인특이인물진행소식취합매련반응,전영검측확증산물,종이건립상응적소식PCR반응체계.이용막편겸획취배태소체래원적단개세포,통과소식PCR반응검측상응시종기인적표체정황.결과 학정료BMAL1、CLOCK、CRY1화CRY2기인적확증삼수.증명재차조건하무비특이확증,병차능구검측도지소량개고패적목적분자.이용차검측체계발현,부분배태소체세포중BMAL1、CLOCK、CRY1화CRY2시종기인배로불완정.결론 소식PCR방법능구령민지、이차특이지종단세포중검측출일조시종기인적표체,시종기인적전록재배태소체세포중병불일치,즉시종기인적배로불완정.시종기인가능재세포분화과정중발휘착모충작용.
