生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2008年
1期
21-23
,共3页
徐学武%裴树俊%黄盛东%俞卫锋
徐學武%裴樹俊%黃盛東%俞衛鋒
서학무%배수준%황성동%유위봉
神经生长因子%分泌型表达%β-内啡肽
神經生長因子%分泌型錶達%β-內啡肽
신경생장인자%분비형표체%β-내배태
目的:构建人神经生长因子信号肽与人β-内啡肽融合基因的真核表达载体,研究人神经生长因子信号肽介导β-内啡肽的分泌表达.方法:取得人基因组后,PCR 法获取人的神经生长因子信号肽部分序列及人β-内啡肽序列;通过 SOE-PCR法将两段 DNA 序列连接,然后插入到真核表达载体内,测序正确后扩增转染级的真核表达载体.表达载体脂质体法转染 NIH3T3细胞,转染后 48-72h 收集细胞及培养上清,RT-PCR 法检测融合基因的转录.RIA 法测定细胞外β-内啡肽的浓度.结果:成功构建全人源的分泌型表达β-内啡肽的真核表达载体,DNA 序列经测序完全符合实验设计;融合基因能够顺利地得到转录并进行表达翻译,在细胞培养上清中可检测到其产物.结论:构建的真核表达载体能够分泌表达人β-内啡肽,提示人神经生长因子信号肽序列能够发挥其介导蛋白产物分泌表达的作用.
目的:構建人神經生長因子信號肽與人β-內啡肽融閤基因的真覈錶達載體,研究人神經生長因子信號肽介導β-內啡肽的分泌錶達.方法:取得人基因組後,PCR 法穫取人的神經生長因子信號肽部分序列及人β-內啡肽序列;通過 SOE-PCR法將兩段 DNA 序列連接,然後插入到真覈錶達載體內,測序正確後擴增轉染級的真覈錶達載體.錶達載體脂質體法轉染 NIH3T3細胞,轉染後 48-72h 收集細胞及培養上清,RT-PCR 法檢測融閤基因的轉錄.RIA 法測定細胞外β-內啡肽的濃度.結果:成功構建全人源的分泌型錶達β-內啡肽的真覈錶達載體,DNA 序列經測序完全符閤實驗設計;融閤基因能夠順利地得到轉錄併進行錶達翻譯,在細胞培養上清中可檢測到其產物.結論:構建的真覈錶達載體能夠分泌錶達人β-內啡肽,提示人神經生長因子信號肽序列能夠髮揮其介導蛋白產物分泌錶達的作用.
목적:구건인신경생장인자신호태여인β-내배태융합기인적진핵표체재체,연구인신경생장인자신호태개도β-내배태적분비표체.방법:취득인기인조후,PCR 법획취인적신경생장인자신호태부분서렬급인β-내배태서렬;통과 SOE-PCR법장량단 DNA 서렬련접,연후삽입도진핵표체재체내,측서정학후확증전염급적진핵표체재체.표체재체지질체법전염 NIH3T3세포,전염후 48-72h 수집세포급배양상청,RT-PCR 법검측융합기인적전록.RIA 법측정세포외β-내배태적농도.결과:성공구건전인원적분비형표체β-내배태적진핵표체재체,DNA 서렬경측서완전부합실험설계;융합기인능구순리지득도전록병진행표체번역,재세포배양상청중가검측도기산물.결론:구건적진핵표체재체능구분비표체인β-내배태,제시인신경생장인자신호태서렬능구발휘기개도단백산물분비표체적작용.
