CAJ | 학술논문

目的:利用原核表达系统构建Tec激酶区作用蛋白RAI16的融合蛋白表达载体,并进行表达条件的优化和初步纯化.方法:设计基因拼接引物,合成RAl16 cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的RAI16基因与pGEX4T-2载体相连接、转化、筛选.将鉴定阳性的重组子质粒转人大肠杆菌BL-21表达茵中,采用SDS-PAGE电泳分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白的表达.结果:成功构建RAl16蛋白原核表达栽体.采用0.4 mm01/L IPTG、30℃诱导4 h,获得较高表达目的蛋白.融合蛋白主要以包涵体形式表达,将包涵体进行尿素法变性复性和亲和层析柱处理后,获得可溶的高纯度GST-多肽融合蛋白.结论:Tec激酶区作用蛋白RAl16融合蛋白表达的载体和纯化.是制备RAl16多抗以及进一步验证与Tec体外结合作用实验的基础.
목적:이용원핵표체계통구건Tec격매구작용단백RAI16적융합단백표체재체,병진행표체조건적우화화초보순화.방법:설계기인병접인물,합성RAl16 cDNA서렬,장기련접우극륭재체pMD18-T중;장매절、순화적RAI16기인여pGEX4T-2재체상련접、전화、사선.장감정양성적중조자질립전인대장간균BL-21표체인중,채용SDS-PAGE전영분석불동농도유도제이병기류대-D-반유당감(IPTG)、불동유도온도、불동유도시간하목적단백적표체.결과:성공구건RAl16단백원핵표체재체.채용0.4 mm01/L IPTG、30℃유도4 h,획득교고표체목적단백.융합단백주요이포함체형식표체,장포함체진행뇨소법변성복성화친화층석주처리후,획득가용적고순도GST-다태융합단백.결론:Tec격매구작용단백RAl16융합단백표체적재체화순화.시제비RAl16다항이급진일보험증여Tec체외결합작용실험적기출.