浙江医学
浙江醫學
절강의학
ZHEJIANG MEDICAL JOURNAL
2010年
8期
1144-1147,1160
,共5页
胡钱红%林瑞霞%杨青%沈树红
鬍錢紅%林瑞霞%楊青%瀋樹紅
호전홍%림서하%양청%침수홍
Hint2%肾小球系膜细胞%多聚IgG%小鼠
Hint2%腎小毬繫膜細胞%多聚IgG%小鼠
Hint2%신소구계막세포%다취IgG%소서
目的观察免疫复合物AIgG刺激小鼠肾小球系膜细胞(GMCs)后不同增殖状态下Hint2-mRNA的表达量变化情况及Hint2蛋白过表达对免疫复合物AIgG刺激的小鼠GMCs不同增殖状态下的影响.方法 (1)采用CCK-8法检测免疫复合物AIgG刺激体外培养小鼠GMCs增殖的量-效和时-效关系.(2)采用SYBR Green Real-time PCR技术检测不同浓度的AIgG(0、1000、2000μg/ml)刺激小鼠GMCs增殖后的Hint2-mRNA表达量的变化情况.(3)依次构建Hint2-Pmd19克隆载体及Hint2-MigR1表达载体,采用磷酸钙共沉淀法将MigR1和Hint2-MigR1质粒分别成功转染小鼠GMCs.(4)将MigR1和Hint2-MigR1质粒分别转染小鼠GMCs后,并用流式细胞术将两者转染效率调整至一致,分别予不同浓度的AIgG(0、1000、2000μg/ml)刺激小鼠GMCs 36h后,再用流式细胞术检测两者转染细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达的阳性率.结果 ( 1)AIgG对体外培养小鼠GMCs具有明显的促增殖作用,以2 000μg/ml组作用最强.(2)Hint2-mRNA的表达量与小鼠GMCs的增殖状态呈负相关.(3)MigR1和Hint2-Mig刚质粒通过磷酸钙共沉淀法均能成功转染小鼠GMCs,于荧光倒置显微镜下可见GFP阳性的细胞,FCM检测两者转染效率分别为38.22%和20 44%.(4)FCM检测不同浓度的AIgG刺激转染小鼠GMCs中GFP的阳性率:Hint2蛋白过表达组和对照组水平的差异均无统计学意义.结论 Hint2-mRNA的表达量与小鼠GMCs的增殖状态呈负相关;单独Hint2蛋白过表达对小鼠GMCs的增殖状态未见明显影响.
目的觀察免疫複閤物AIgG刺激小鼠腎小毬繫膜細胞(GMCs)後不同增殖狀態下Hint2-mRNA的錶達量變化情況及Hint2蛋白過錶達對免疫複閤物AIgG刺激的小鼠GMCs不同增殖狀態下的影響.方法 (1)採用CCK-8法檢測免疫複閤物AIgG刺激體外培養小鼠GMCs增殖的量-效和時-效關繫.(2)採用SYBR Green Real-time PCR技術檢測不同濃度的AIgG(0、1000、2000μg/ml)刺激小鼠GMCs增殖後的Hint2-mRNA錶達量的變化情況.(3)依次構建Hint2-Pmd19剋隆載體及Hint2-MigR1錶達載體,採用燐痠鈣共沉澱法將MigR1和Hint2-MigR1質粒分彆成功轉染小鼠GMCs.(4)將MigR1和Hint2-MigR1質粒分彆轉染小鼠GMCs後,併用流式細胞術將兩者轉染效率調整至一緻,分彆予不同濃度的AIgG(0、1000、2000μg/ml)刺激小鼠GMCs 36h後,再用流式細胞術檢測兩者轉染細胞綠色熒光蛋白(GFP)錶達的暘性率.結果 ( 1)AIgG對體外培養小鼠GMCs具有明顯的促增殖作用,以2 000μg/ml組作用最彊.(2)Hint2-mRNA的錶達量與小鼠GMCs的增殖狀態呈負相關.(3)MigR1和Hint2-Mig剛質粒通過燐痠鈣共沉澱法均能成功轉染小鼠GMCs,于熒光倒置顯微鏡下可見GFP暘性的細胞,FCM檢測兩者轉染效率分彆為38.22%和20 44%.(4)FCM檢測不同濃度的AIgG刺激轉染小鼠GMCs中GFP的暘性率:Hint2蛋白過錶達組和對照組水平的差異均無統計學意義.結論 Hint2-mRNA的錶達量與小鼠GMCs的增殖狀態呈負相關;單獨Hint2蛋白過錶達對小鼠GMCs的增殖狀態未見明顯影響.
목적관찰면역복합물AIgG자격소서신소구계막세포(GMCs)후불동증식상태하Hint2-mRNA적표체량변화정황급Hint2단백과표체대면역복합물AIgG자격적소서GMCs불동증식상태하적영향.방법 (1)채용CCK-8법검측면역복합물AIgG자격체외배양소서GMCs증식적량-효화시-효관계.(2)채용SYBR Green Real-time PCR기술검측불동농도적AIgG(0、1000、2000μg/ml)자격소서GMCs증식후적Hint2-mRNA표체량적변화정황.(3)의차구건Hint2-Pmd19극륭재체급Hint2-MigR1표체재체,채용린산개공침정법장MigR1화Hint2-MigR1질립분별성공전염소서GMCs.(4)장MigR1화Hint2-MigR1질립분별전염소서GMCs후,병용류식세포술장량자전염효솔조정지일치,분별여불동농도적AIgG(0、1000、2000μg/ml)자격소서GMCs 36h후,재용류식세포술검측량자전염세포록색형광단백(GFP)표체적양성솔.결과 ( 1)AIgG대체외배양소서GMCs구유명현적촉증식작용,이2 000μg/ml조작용최강.(2)Hint2-mRNA적표체량여소서GMCs적증식상태정부상관.(3)MigR1화Hint2-Mig강질립통과린산개공침정법균능성공전염소서GMCs,우형광도치현미경하가견GFP양성적세포,FCM검측량자전염효솔분별위38.22%화20 44%.(4)FCM검측불동농도적AIgG자격전염소서GMCs중GFP적양성솔:Hint2단백과표체조화대조조수평적차이균무통계학의의.결론 Hint2-mRNA적표체량여소서GMCs적증식상태정부상관;단독Hint2단백과표체대소서GMCs적증식상태미견명현영향.
