广东药学院学报
廣東藥學院學報
엄동약학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY
2011年
2期
140-143
,共4页
吴文如%李薇%赖小平%吴业剑%梁倩影
吳文如%李薇%賴小平%吳業劍%樑倩影
오문여%리미%뢰소평%오업검%량천영
诃子%简单序列重复区间%反应体系
訶子%簡單序列重複區間%反應體繫
가자%간단서렬중복구간%반응체계
目的 建立和优化药用植物诃子的ISSR-PCR反应体系.方法 以诃子叶片为实验材料,采用CTAB法提取诃子DNA为模板,通过单因素和双因素实验,研究诃子ISSR-PCR反应体系中DNA模板、Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、dNTPs等的用量,以及退火温度对扩增结果的影响.结果 建立了适合诃子ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在50μL体系中含有1×PCR Buffer、DNA模板50～100 ng、Taq DNA聚合酶3 U、Mg2+ 2 mmol/L、引物0.8 mmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L.扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性30 s,根据不同引物的退火温度复性30 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;最后72℃延伸5 min;反应结束后,4℃保存.同时筛选出9条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.结论 这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行诃子鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础.
目的 建立和優化藥用植物訶子的ISSR-PCR反應體繫.方法 以訶子葉片為實驗材料,採用CTAB法提取訶子DNA為模闆,通過單因素和雙因素實驗,研究訶子ISSR-PCR反應體繫中DNA模闆、Taq DNA聚閤酶、Mg2+、引物、dNTPs等的用量,以及退火溫度對擴增結果的影響.結果 建立瞭適閤訶子ISSR分析的反應體繫和擴增程序,即在50μL體繫中含有1×PCR Buffer、DNA模闆50～100 ng、Taq DNA聚閤酶3 U、Mg2+ 2 mmol/L、引物0.8 mmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L.擴增程序為94℃預變性5 min;94℃變性30 s,根據不同引物的退火溫度複性30 s,72℃延伸1.5 min,共35箇循環;最後72℃延伸5 min;反應結束後,4℃保存.同時篩選齣9條擴增穩定、多態性豐富的ISSR引物.結論 這一優化體繫的建立為今後利用ISSR標記技術進行訶子鑒定及種質資源遺傳多樣性分析奠定瞭基礎.
목적 건립화우화약용식물가자적ISSR-PCR반응체계.방법 이가자협편위실험재료,채용CTAB법제취가자DNA위모판,통과단인소화쌍인소실험,연구가자ISSR-PCR반응체계중DNA모판、Taq DNA취합매、Mg2+、인물、dNTPs등적용량,이급퇴화온도대확증결과적영향.결과 건립료괄합가자ISSR분석적반응체계화확증정서,즉재50μL체계중함유1×PCR Buffer、DNA모판50～100 ng、Taq DNA취합매3 U、Mg2+ 2 mmol/L、인물0.8 mmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L.확증정서위94℃예변성5 min;94℃변성30 s,근거불동인물적퇴화온도복성30 s,72℃연신1.5 min,공35개순배;최후72℃연신5 min;반응결속후,4℃보존.동시사선출9조확증은정、다태성봉부적ISSR인물.결론 저일우화체계적건립위금후이용ISSR표기기술진행가자감정급충질자원유전다양성분석전정료기출.
