微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21的原核表达及鉴定
미소은포자충점부상관단백기인CP21적원핵표체급감정
Prokaryotic Expression and Identification of Surface Adhesion Protein CP21 of Cry ptos poridium Parvum
  • 万方数据
    畜牧兽医学报 축목수의학보

    2011年 8期 1140-1144 ,共5页

    任保彦%陈玉兰%宫鹏涛%李巍%李建华%苏利波%李赫%杨举%刁玉梅%张西臣

    임보언%진옥란%궁붕도%리외%리건화%소리파%리혁%양거%조옥매%장서신

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    本研究旨在克隆微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21开放阅读框,构建其原核表达质粒,并对获得的融合蛋白进行鉴定.从含CP21基因的噬菌体中提取模板DNA,PCR扩增基因片段,构建pET-28a-CP21原核表达质粒,转化至埃希氏大肠杆菌BL21 (DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定.用原核表达蛋白免疫小鼠,制备抗重组蛋白多抗,对蛋白进行定位.结果表明成功扩增出CP21基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量为25 ku的融合蛋白,Western blotting证明表达的CP21融合蛋白能与抗C.parvum多克隆抗体产生特异性反应.免疫荧光结果表明:CP21基因在子孢子和卵囊期均表达,且表达产物位于子孢子表膜和卵囊壁表面.CP21是一种与侵入机制有关的黏附相关蛋白.研究结果为微小隐孢子虫的免疫学诊断及疫苗研制奠定了基础.
    본연구지재극륭미소은포자충점부상관단백기인CP21개방열독광,구건기원핵표체질립,병대획득적융합단백진행감정.종함CP21기인적서균체중제취모판DNA,PCR확증기인편단,구건pET-28a-CP21원핵표체질립,전화지애희씨대장간균BL21 (DE3)중,IPTG유도표체,표체산물경SDS-PAGE화Western blotting분석감정.용원핵표체단백면역소서,제비항중조단백다항,대단백진행정위.결과표명성공확증출CP21기인,병구건원핵표체질립,전화지대장간균중표체출상대분자질량위25 ku적융합단백,Western blotting증명표체적CP21융합단백능여항C.parvum다극륭항체산생특이성반응.면역형광결과표명:CP21기인재자포자화란낭기균표체,차표체산물위우자포자표막화란낭벽표면.CP21시일충여침입궤제유관적점부상관단백.연구결과위미소은포자충적면역학진단급역묘연제전정료기출.
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