东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
12期
86-90
,共5页
石锐%包红梅%姜永萍%乔传玲%陈化兰%王秀荣%陈维多
石銳%包紅梅%薑永萍%喬傳玲%陳化蘭%王秀榮%陳維多
석예%포홍매%강영평%교전령%진화란%왕수영%진유다
禽流感%H9%原核表达
禽流感%H9%原覈錶達
금류감%H9%원핵표체
应用带有His6尾的pET原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,将禽流感A/Turkey/Wisconsin/66(HgN2)的HA基因克隆至原核表达载体pET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入,并且阅读框正确,获得重组质粒pET30a-H9.将此重组质粒转化到宿主菌BL21中,用诱导剂异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)进行诱导,产物处理后进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹和薄层扫描分析.结果发现HA蛋白可被大量表达,主要以包涵体形式存在,表达产物分子质量约64 ku,与理论推测值一致；菌液OD600值为1.0、IPTG终浓度为0.3 mmol· L-1、诱导时间4h,其蛋白表达量最大,约占菌体蛋白总量的35％左右；通过免疫印迹试验发现,表达的蛋白可被禽流感H9亚型阳性血清特异性识别.研究结果表明,可以用原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,其产物具有免疫原性,可以用作禽流感抗体检测的免疫诊断试剂.
應用帶有His6尾的pET原覈錶達繫統對禽流感病毒血凝素蛋白進行錶達,將禽流感A/Turkey/Wisconsin/66(HgN2)的HA基因剋隆至原覈錶達載體pET-30a中,經酶切、PCR擴增和測序分析確證其插入,併且閱讀框正確,穫得重組質粒pET30a-H9.將此重組質粒轉化到宿主菌BL21中,用誘導劑異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)進行誘導,產物處理後進行SDS-PAGE電泳、免疫印跡和薄層掃描分析.結果髮現HA蛋白可被大量錶達,主要以包涵體形式存在,錶達產物分子質量約64 ku,與理論推測值一緻；菌液OD600值為1.0、IPTG終濃度為0.3 mmol· L-1、誘導時間4h,其蛋白錶達量最大,約佔菌體蛋白總量的35％左右；通過免疫印跡試驗髮現,錶達的蛋白可被禽流感H9亞型暘性血清特異性識彆.研究結果錶明,可以用原覈錶達繫統對禽流感病毒血凝素蛋白進行錶達,其產物具有免疫原性,可以用作禽流感抗體檢測的免疫診斷試劑.
응용대유His6미적pET원핵표체계통대금류감병독혈응소단백진행표체,장금류감A/Turkey/Wisconsin/66(HgN2)적HA기인극륭지원핵표체재체pET-30a중,경매절、PCR확증화측서분석학증기삽입,병차열독광정학,획득중조질립pET30a-H9.장차중조질립전화도숙주균BL21중,용유도제이병기류대-β-D반유당감(IPTG)진행유도,산물처리후진행SDS-PAGE전영、면역인적화박층소묘분석.결과발현HA단백가피대량표체,주요이포함체형식존재,표체산물분자질량약64 ku,여이론추측치일치；균액OD600치위1.0、IPTG종농도위0.3 mmol· L-1、유도시간4h,기단백표체량최대,약점균체단백총량적35％좌우；통과면역인적시험발현,표체적단백가피금류감H9아형양성혈청특이성식별.연구결과표명,가이용원핵표체계통대금류감병독혈응소단백진행표체,기산물구유면역원성,가이용작금류감항체검측적면역진단시제.
