解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2012年
4期
484-489
,共6页
陈炜%张雷%孔祥增%张金平%赵昱%李航%李莉%赵春芳
陳煒%張雷%孔祥增%張金平%趙昱%李航%李莉%趙春芳
진위%장뢰%공상증%장금평%조욱%리항%리리%조춘방
骨髓间充质干细胞%心肌细胞%细胞分化%流式细胞术%大鼠
骨髓間充質榦細胞%心肌細胞%細胞分化%流式細胞術%大鼠
골수간충질간세포%심기세포%세포분화%류식세포술%대서
目的 探讨转染外源性Nkx2.5基因对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌细胞分化的作用.方法 全骨髓法分离大鼠BMSCs,经多次传代培养扩增纯化,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90、CD45.脂质体法将pEGFP-N1-Nkx2.5质粒转染BMSCs,观察细胞形态变化;转染48h后,免疫细胞化学检测Nkx2.5的表达.转染4周后,Western blotting检测心肌肌钙蛋白(cTnT)的表达;免疫细胞化学检测cTnT、GATA4的表达,鉴定细胞分化.结果 第3代生长良好的细胞中表达CD90而不表达CD45的占细胞总数的99%.转染48h后,实验组可见部分细胞表达绿色的Nkx2.5-pEGFP融合蛋白,免疫细胞化学结果 表明,Nkx2.5蛋白只在实验组有表达(n=3).转染4周后,Western blotting、免疫细胞化学结果 表明,cTnT、GATA4表达在实验组显著高于pEGFP-N1空质粒转染组和空白对照组(n=3).结论 外源表达Nkx2.5基因能够增强BMSCs向心肌分化.
目的 探討轉染外源性Nkx2.5基因對大鼠骨髓間充質榦細胞(BMSCs)嚮心肌細胞分化的作用.方法 全骨髓法分離大鼠BMSCs,經多次傳代培養擴增純化,流式細胞術鑒定細胞錶麵抗原CD90、CD45.脂質體法將pEGFP-N1-Nkx2.5質粒轉染BMSCs,觀察細胞形態變化;轉染48h後,免疫細胞化學檢測Nkx2.5的錶達.轉染4週後,Western blotting檢測心肌肌鈣蛋白(cTnT)的錶達;免疫細胞化學檢測cTnT、GATA4的錶達,鑒定細胞分化.結果 第3代生長良好的細胞中錶達CD90而不錶達CD45的佔細胞總數的99%.轉染48h後,實驗組可見部分細胞錶達綠色的Nkx2.5-pEGFP融閤蛋白,免疫細胞化學結果 錶明,Nkx2.5蛋白隻在實驗組有錶達(n=3).轉染4週後,Western blotting、免疫細胞化學結果 錶明,cTnT、GATA4錶達在實驗組顯著高于pEGFP-N1空質粒轉染組和空白對照組(n=3).結論 外源錶達Nkx2.5基因能夠增彊BMSCs嚮心肌分化.
목적 탐토전염외원성Nkx2.5기인대대서골수간충질간세포(BMSCs)향심기세포분화적작용.방법 전골수법분리대서BMSCs,경다차전대배양확증순화,류식세포술감정세포표면항원CD90、CD45.지질체법장pEGFP-N1-Nkx2.5질립전염BMSCs,관찰세포형태변화;전염48h후,면역세포화학검측Nkx2.5적표체.전염4주후,Western blotting검측심기기개단백(cTnT)적표체;면역세포화학검측cTnT、GATA4적표체,감정세포분화.결과 제3대생장량호적세포중표체CD90이불표체CD45적점세포총수적99%.전염48h후,실험조가견부분세포표체록색적Nkx2.5-pEGFP융합단백,면역세포화학결과 표명,Nkx2.5단백지재실험조유표체(n=3).전염4주후,Western blotting、면역세포화학결과 표명,cTnT、GATA4표체재실험조현저고우pEGFP-N1공질립전염조화공백대조조(n=3).결론 외원표체Nkx2.5기인능구증강BMSCs향심기분화.
