中华肝脏病杂志
中華肝髒病雜誌
중화간장병잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
2007年
2期
111-113
,共3页
基因%肝炎病毒,乙型%酵母双杂交技术
基因%肝炎病毒,乙型%酵母雙雜交技術
기인%간염병독,을형%효모쌍잡교기술
目的 筛选并克隆人肝细胞中与HBsAg中蛋白(MHBs)相互作用肝细胞蛋白的基因,探讨MHBs的生物学功能.方法 应用PCR法以HBV adr亚型全序质粒A7为模板扩增MHBs基因,克隆到Pgem-T载体中扩增并测序鉴定,EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后回收连接到酵母表达载体Pgbkt-7中并应用酵母双杂交系统3,构建MHBs诱饵质粒并转化酵母AH109,与转化了人肝Cdna文库质粒Pact2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖苷酸上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠杆菌氨苄青霉素-LB平板上,选择并测序结果在GenBank中进行生物信息学分析.结果 构建MHBs酵母细胞表达载体,配合后筛选出既能在四缺培养基(SD/-Trp-Leu-Ade-His)上培养也能在铺有X-α-半乳糖苷酸的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落2个,其中一个克隆为人醛缩酶B、另一个克隆为未知功能基因,新基因命名为MBP1.结论 扩增出MHBs基因,用酵母双杂交技术筛选出2个与MHBs相互作用的肝细胞结合蛋白编码基因,为阐明MHBs的生物学功能及HBV损害肝细胞、致癌等方面的作用提供了新线索.
目的 篩選併剋隆人肝細胞中與HBsAg中蛋白(MHBs)相互作用肝細胞蛋白的基因,探討MHBs的生物學功能.方法 應用PCR法以HBV adr亞型全序質粒A7為模闆擴增MHBs基因,剋隆到Pgem-T載體中擴增併測序鑒定,EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ雙酶切後迴收連接到酵母錶達載體Pgbkt-7中併應用酵母雙雜交繫統3,構建MHBs誘餌質粒併轉化酵母AH109,與轉化瞭人肝Cdna文庫質粒Pact2的酵母細胞Y187進行配閤,在營養缺陷型培養基和X-α-半乳糖苷痠上進行雙重篩選暘性菌落,提取暘性酵母菌落的質粒轉化大腸桿菌氨芐青黴素-LB平闆上,選擇併測序結果在GenBank中進行生物信息學分析.結果 構建MHBs酵母細胞錶達載體,配閤後篩選齣既能在四缺培養基(SD/-Trp-Leu-Ade-His)上培養也能在鋪有X-α-半乳糖苷痠的四缺培養基上生長,併變成藍色的真暘性菌落2箇,其中一箇剋隆為人醛縮酶B、另一箇剋隆為未知功能基因,新基因命名為MBP1.結論 擴增齣MHBs基因,用酵母雙雜交技術篩選齣2箇與MHBs相互作用的肝細胞結閤蛋白編碼基因,為闡明MHBs的生物學功能及HBV損害肝細胞、緻癌等方麵的作用提供瞭新線索.
목적 사선병극륭인간세포중여HBsAg중단백(MHBs)상호작용간세포단백적기인,탐토MHBs적생물학공능.방법 응용PCR법이HBV adr아형전서질립A7위모판확증MHBs기인,극륭도Pgem-T재체중확증병측서감정,EcoR Ⅰ화BamH Ⅰ쌍매절후회수련접도효모표체재체Pgbkt-7중병응용효모쌍잡교계통3,구건MHBs유이질립병전화효모AH109,여전화료인간Cdna문고질립Pact2적효모세포Y187진행배합,재영양결함형배양기화X-α-반유당감산상진행쌍중사선양성균락,제취양성효모균락적질립전화대장간균안변청매소-LB평판상,선택병측서결과재GenBank중진행생물신식학분석.결과 구건MHBs효모세포표체재체,배합후사선출기능재사결배양기(SD/-Trp-Leu-Ade-His)상배양야능재포유X-α-반유당감산적사결배양기상생장,병변성람색적진양성균락2개,기중일개극륭위인철축매B、령일개극륭위미지공능기인,신기인명명위MBP1.결론 확증출MHBs기인,용효모쌍잡교기술사선출2개여MHBs상호작용적간세포결합단백편마기인,위천명MHBs적생물학공능급HBV손해간세포、치암등방면적작용제공료신선색.
