中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2002年
6期
408-412
,共5页
师东方%李一经%范锡龙%贾永清%王君伟%刘宝全%陈淑红
師東方%李一經%範錫龍%賈永清%王君偉%劉寶全%陳淑紅
사동방%리일경%범석룡%가영청%왕군위%류보전%진숙홍
猪轮状病毒%VP7基因%克隆%表达质粒%构建
豬輪狀病毒%VP7基因%剋隆%錶達質粒%構建
저륜상병독%VP7기인%극륭%표체질립%구건
用MA104细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株JL94.利用一对根据Genebank中已发表的轮状病毒VP7基因cDNA序列而设计并合成的引物,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从JL94毒株扩增出VP7基因全长cDNA.将其插入pMD18-T载体中,构建了重组质粒pMD18-T-JL94/VP7,并对其进行了HindⅢ,HindⅢ和BamHI的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定,证明pMD18-T-JL94/VP7中的插入基因为轮状病毒的VP7基因.重新设计一个带有Kozak序列的上游引物,通过PCR扩增出带有Kozak序列的vp7基因并将其插入pMD18-T载体中构建了重组质粒pMD18-T-VP7,酶切鉴定其大小和方向后,与真核表达载体pcDNA 3.1(+)分别用HindⅢ和BamHI双酶切,胶回收纯化后连接.经酶切和核苷酸序列检测鉴定,成功地构建了真核表达质粒pcDNA-VP7.
用MA104細胞培養增殖瞭輪狀病毒地方分離株JL94.利用一對根據Genebank中已髮錶的輪狀病毒VP7基因cDNA序列而設計併閤成的引物,通過逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)從JL94毒株擴增齣VP7基因全長cDNA.將其插入pMD18-T載體中,構建瞭重組質粒pMD18-T-JL94/VP7,併對其進行瞭HindⅢ,HindⅢ和BamHI的單、雙酶切初步鑒定及其覈苷痠序列測定,證明pMD18-T-JL94/VP7中的插入基因為輪狀病毒的VP7基因.重新設計一箇帶有Kozak序列的上遊引物,通過PCR擴增齣帶有Kozak序列的vp7基因併將其插入pMD18-T載體中構建瞭重組質粒pMD18-T-VP7,酶切鑒定其大小和方嚮後,與真覈錶達載體pcDNA 3.1(+)分彆用HindⅢ和BamHI雙酶切,膠迴收純化後連接.經酶切和覈苷痠序列檢測鑒定,成功地構建瞭真覈錶達質粒pcDNA-VP7.
용MA104세포배양증식료륜상병독지방분리주JL94.이용일대근거Genebank중이발표적륜상병독VP7기인cDNA서렬이설계병합성적인물,통과역전록-취합매련반응(RT-PCR)종JL94독주확증출VP7기인전장cDNA.장기삽입pMD18-T재체중,구건료중조질립pMD18-T-JL94/VP7,병대기진행료HindⅢ,HindⅢ화BamHI적단、쌍매절초보감정급기핵감산서렬측정,증명pMD18-T-JL94/VP7중적삽입기인위륜상병독적VP7기인.중신설계일개대유Kozak서렬적상유인물,통과PCR확증출대유Kozak서렬적vp7기인병장기삽입pMD18-T재체중구건료중조질립pMD18-T-VP7,매절감정기대소화방향후,여진핵표체재체pcDNA 3.1(+)분별용HindⅢ화BamHI쌍매절,효회수순화후련접.경매절화핵감산서렬검측감정,성공지구건료진핵표체질립pcDNA-VP7.
