CAJ | 학술논문

采用RT-PCR方法扩增犬冠状病毒(CCV)YS1、C11和NL-18株5′端部分S基因序列,以随机插入DNA法对CCV YS1株纯化的PCR产物标记32P同位素,制备核酸探针,并与3株CCV反转录产物杂交.用平端连接法将3株CCV PCR产物克隆于pUC19 Sma I位点或pGEM-T载体中,经PCR鉴定为正确重组质粒.以双脱氧末端终止法测定了重组质粒的cDNA核苷酸序列,并用DNASIS计算机软件进行多重比较分析,绘制系统树.结果表明,所制备的核酸探针可与3株CCV反转录产物杂交,其核苷酸序列与多株CCV相应序列的同源性高达91.9%～99.1%,为CCV的保守区.由此说明,制备的核酸探针可用于犬CCV感染的分子流行病学研究.
채용RT-PCR방법확증견관상병독(CCV)YS1、C11화NL-18주5′단부분S기인서렬,이수궤삽입DNA법대CCV YS1주순화적PCR산물표기32P동위소,제비핵산탐침,병여3주CCV반전록산물잡교.용평단련접법장3주CCV PCR산물극륭우pUC19 Sma I위점혹pGEM-T재체중,경PCR감정위정학중조질립.이쌍탈양말단종지법측정료중조질립적cDNA핵감산서렬,병용DNASIS계산궤연건진행다중비교분석,회제계통수.결과표명,소제비적핵산탐침가여3주CCV반전록산물잡교,기핵감산서렬여다주CCV상응서렬적동원성고체91.9%～99.1%,위CCV적보수구.유차설명,제비적핵산탐침가용우견CCV감염적분자류행병학연구.